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  • 纳米抗体异源的研究进展

    分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

    摘要: 骆驼体内存在天然缺失轻链的重链抗体(HcAb),其单域抗原结合片段也称为VHH或纳米抗体(nanobody,Nb),是目前已知的最小抗原结合片段。与传统抗体相比,纳米抗体具有分子量小(12-15KDa)、稳定性好和免疫原性低等特点,这些特点使得VHH在基础研究、诊断及治疗上具有极大的应用价值,目前已有多种纳米抗体进入了临床研究阶段。本文综述了近年来VHH在革兰氏阴性菌(大肠杆菌)、革兰氏阳性菌(芽孢杆菌和乳酸杆菌)、酵母、丝状真菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞和植物细胞中异源表达的研究现状,包括表达系统、宿主、载体特点、载体构建方式及产量等;从分子水平、表达水平和理性设计三个层面探讨了纳米抗体产量提高的策略,希望为纳米抗体同行研究者提供一些借鉴和思路。

  • 夏枯草PvGGPPS基因的克隆和诱导分析

    分类: 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间: 2019-08-27 合作期刊: 《广西植物》

    摘要: 为探究夏枯草中GGPPS基因的生物学特性及功能,本实验在夏枯草转录组测序的基础上设计特异性引物,采用逆转录 PCR 技术获得夏枯草中GGPPS基因的全长核苷酸序列,并进行生物信息学分析;采用 qPCR 法分析PvGGPPS基因在不同外源性物质诱导下在夏枯草果穗中的表达量以及该基因在夏枯草不同组织中的表达量。结果表明:PvGGPPS 基因开放阅读框1 092 bp,编码363个氨基酸,理论分子量为38 815.68 D,等电点为5.69。PvGGPPS蛋白具有异戊烯基焦磷酸合酶家族的特征结构域。系统进化树表明PvGGPPS蛋白与丹参、毛喉鞘蕊花GGPPS蛋白具有较高的亲缘关系。qPCR分析表明,PvGGPPS基因在叶中表达量高于果穗及茎。对果穗施加7种外源性物质处理24 h后,GA3 处理组该基因表达量升高。PvGGPPS 基因在夏枯草不同组织中表达量差异较大,且受外源物质诱导表达。该研究结果为进一步研究PvGGPPS 基因对夏枯草萜类成分合成途径中的功能及表达调控奠定基础。

  • 脾酪氨酸激酶通过调控Fra-1抑制结直肠癌细胞的增殖和促进其凋亡

    分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》

    摘要: 目的:探讨过表达脾酪氨酸激酶(SYK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的相关机制。方法利用pcDNA.3.1质粒构建重组质粒pcDNA.3.1-SYK,转染结直肠癌细胞,过表达SYK,分组情况如下。(1)pcDNA.3.1-SYK(HCT116):转染pcDNA.3.1-SYK 到HCT116;(2)pcDNA.3.1(HCT116):转染pcDNA.3.1 空载体到HCT116 中;(3)Normal(HCT116):正常HCT116 细胞。(1)pcDNA.3.1-SYK(Sw480):转染pcDNA.3.1-SYK到Sw480;(2)pcDNA.3.1(Sw480):转染pcDNA.3.1 空载体到Sw480中;(3)Normal(Sw480):正常Sw480细胞。应用qRT-PCR法检测结直肠癌和癌旁组织中SYK和Fra-1的mRNA表达量;Western blot法检测SYK和Fra-1的蛋白表达量;MTT法检测细胞生长活力;BrdU方法检测细胞增殖活性;试剂盒方法检测Caspase-3的活性;Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡情况。结果SYK在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达量均降低(P<0.01);pcDNA.3.1-SYK转染结直肠癌细胞系,SYK的mRNA(P<0.01)和蛋白表达量显著升高(P<0.01),显示SYK过表达成功;SYK过表达后结直肠癌细胞生长活力和增值活性显著降低(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01);另外,SYK过表达后,Fra-1的表达量显著被抑制(P<0.01)。结论过表达SYK对结直肠癌细胞的增殖有抑制作用,并且促进结直肠癌细胞的凋亡,其机制有可能与SYK对Fra-1的调控有关,为结直肠癌的预防和治疗提供参考价值和理论基础。

  • 脾酪氨酸激酶通过调控Fra-1抑制结直肠癌细胞的增殖和促进其凋亡

    分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2018-01-25 合作期刊: 《南方医科大学学报》

    摘要: 目的 探讨过表达脾酪氨酸激酶(SYK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的相关机制。方法 利用pcDNA.3.1质 粒构建重组质粒pcDNA.3.1-SYK,转染结直肠癌细胞,过表达SYK,分组情况如下。(1)pcDNA.3.1-SYK(HCT116)转染 pcDNA.3.1-SYK到HCT116;(2)pcDNA.3.1(HCT116)转染pcDNA.3.1空载体到HCT116中;(3)Normal(HCT116)正常 HCT116细胞。(1)pcDNA.3.1-SYK(Sw480)转染pcDNA.3.1-SYK到Sw480;(2)pcDNA.3.1(Sw480)转染pcDNA.3.1空载体 到Sw480中;(3)Normal(Sw480)正常Sw480细胞。应用qRT-PCR法检测结直肠癌和癌旁组织中SYK和Fra-1的mRNA表达 量;Western blot法检测SYK和Fra-1的蛋白表达量;MTT法检测细胞生长活力;BrdU方法检测细胞增殖活性;试剂盒方法检测 Caspase-3的活性;Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡情况。结果 SYK在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达量均降低 (P<0.01);pcDNA.3.1-SYK转染结直肠癌细胞系,SYK的mRNA(P<0.01)和蛋白表达量显著升高(P<0.01),显示SYK过表达成 功;SYK过表达后结直肠癌细胞生长活力和增值活性显著降低(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.01);另外,SYK过表达后,Fra-1的 表达量显著被抑制(P<0.01)。结论 过表达SYK对结直肠癌细胞的增殖有抑制作用,并且促进结直肠癌细胞的凋亡,其机制有 可能与SYK对Fra-1的调控有关,为结直肠癌的预防和治疗提供参考价值和理论基础。

  • 性写作应用于社会灾难时期心理救援的理论探讨

    分类: 心理学 >> 社会心理学 提交时间: 2023-03-28 合作期刊: 《心理科学进展》

    摘要: 疫情等社会灾难时期, 创伤经历者急剧增加, 加之交通阻断, 传统的心理救援很难及时应对大范围的灾民心理危机; 而表达性写作便于心理学工作者大规模实施, 且可通过电话、网络等远程通讯工具进行指导, 治疗PTSD等心理创伤, 改善生理、心理健康。社会灾难时期表达性写作的机制复杂, 涉及暴露脱敏、意义重建、自我抽离—自我调节、工作记忆优化和认知神经机制正常化; 其疗效受到作者特质、干预时间和写作形式等潜在因素的影响。相应地, 未来应结合本土社会文化因素, 重视在线干预研究, 探索表达性写作相关的认知神经机制, 综合不同的生理、心理健康指标评估表达性写作的疗效。

  • 领导感激能提高员工的追随行为吗?情绪真诚性的作用

    分类: 心理学 >> 社会心理学 提交时间: 2023-03-27 合作期刊: 《心理学报》

    摘要: 感激作为中华民族的传统美德,近年来受到了学者的广泛关注。本文通过结合情绪的社会功能理论和社会等级的双策略理论构建了一个被调节的中介模型,旨在探讨领导感激表达对员工追随行为的影响效果。通过一个情景实验和一个多时点、上下级配对的问卷调查,研究结果证实了所提的理论假设:领导感激表达通过增加感知领导声望促进员工的积极追随行为,通过减少感知领导支配抑制员工的消极追随行为。尤其是当领导情绪表达真诚性高时,上述关系更为强烈。研究结论有助于启示领导者要更多、更真诚地向员工表达感激。

  • 领导感激能提高员工的追随行为吗?情绪真诚性的作用

    提交时间: 2023-03-16 合作期刊: 《心理学报》

    摘要: 感激作为中华民族的传统美德,近年来受到了学者的广泛关注。本文通过结合情绪的社会功能理论和社会等级的双策略理论构建了一个被调节的中介模型,旨在探讨领导感激表达对员工追随行为的影响效果。通过一个情景实验和一个多时点、上下级配对的问卷调查,研究结果证实了所提的理论假设:领导感激表达通过增加感知领导声望促进员工的积极追随行为,通过减少感知领导支配抑制员工的消极追随行为。尤其是当领导情绪表达真诚性高时,上述关系更为强烈。研究结论有助于启示领导者要更多、更真诚地向员工表达感激。

  • 领导感激能提高员工的追随行为吗?情绪真诚性的作用

    分类: 心理学 >> 管理心理学 提交时间: 2023-03-03

    摘要: 感激作为中华民族的传统美德,近年来受到了学者的广泛关注。本文通过结合情绪的社会功能理论和社会等级的双策略理论构建了一个被调节的中介模型,旨在探讨领导感激表达对员工追随行为的影响效果。通过一个情景实验和一个多时点、上下级配对的问卷调查,研究结果证实了所提的理论假设:领导感激表达通过增加感知领导声望进而促进员工的积极追随行为,通过减少感知领导支配进而抑制员工的消极追随行为。尤其是当领导情绪表达真诚性高时,上述关系更为强烈。研究结论有助于启示领导者要更多、更真诚地向员工表达感激。

  • 性写作应用于社会灾难时期心理救援的理论探讨

    分类: 心理学 >> 临床与咨询心理学 分类: 心理学 >> 应用心理学 提交时间: 2022-05-10

    摘要: 疫情等社会灾难时期,创伤经历者急剧增加,加之交通阻断,传统的心理救援很难及时应对大范围的灾民心理危机;而表达性写作便于心理学工作者大规模实施,且可通过电话、网络等远程通讯工具进行指导,治疗PTSD等心理创伤,改善生理、心理健康。社会灾难时期表达性写作的机制复杂,涉及暴露脱敏、意义重建、自我抽离自我调节、工作记忆优化和认知神经机制正常化;其疗效受到作者特质、干预时间和写作形式等潜在因素的影响。相应地,未来应结合本土社会文化因素,重视在线干预研究,探索表达性写作相关的认知神经机制,综合不同的生理、心理健康指标评估表达性写作的疗效。

  • 硒蛋白X基因沉默和过氧化氢处理对人正常肝脏细胞中硒蛋白基因和抗氧化酶活性的影响

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: 本试验旨在探讨硒蛋白X(SelX)基因沉默和过氧化氢(H2O2)处理对人正常肝脏细胞(LO2)中硒蛋白基因表达和抗氧化酶活性的影响,为探索SelX与其他硒蛋白之间的调控关系及SelX的功能奠定基础。对本实验室保存的SelX基因稳定沉默LO2细胞株(siSelX)和对照细胞株(CK),利用噻唑兰(MTT)法比较其生长速率;siSelX和CK用200 μmol/L H2O2处理2.5 h后,采用荧光定量PCR技术考察25个硒蛋白基因的表达量;同时比较SelX基因沉默以及H2O2处理对LO2细胞株中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)的影响。结果显示:1)SelX基因沉默显著降低了LO2细胞株的生长速率(P<0.05);2)SelX基因沉默显著上调了Gpx6、Txnrd2、Seli基因的表达量(P<0.05),显著下调了Dio2、Dio3、Selm、Sepw1基因的表达量(P<0.05);H2O2处理显著上调了Dio1基因的表达量(P<0.05),显著下调了Gpx2基因的表达量(P<0.05);SelX基因沉默后H2O2处理显著上调了Gpx6、Txnrd2、Dio1基因的表达量(P<0.05),显著下调了Txnrd3、Dio2、Selm、Sepw1、Selv基因的表达量(P<0.05);3)SelX基因沉默显著提高了LO2细胞株GSH-Px活性(P<0.05),显著提高了SOD的活性(P<0.05);SelX基因沉默后H2O2处理显著提高了GSH-Px活性(P<0.05)。由此可见,SelX基因沉默降低了LO2细胞株的生长速率,SelX基因沉默后H2O2处理影响部分硒蛋白基因在细胞中的表达量,同时也影响了GSH-Px、SOD活性。

  • 花生铝响应类受体蛋白激酶 AhPRK4 的原核分析

    分类: 生物学 >> 植物学 提交时间: 2022-10-27 合作期刊: 《广西植物》

    摘要: 花粉类受体蛋白激酶(pollen receptor like kinase,PRK)是一类富 LRR 结构域的类 受体蛋白激酶,不仅在花粉发育和植物受精中发挥作用,也在胁迫响应中发挥作用。基于 对前期花生根尖铝胁迫转录组数据的分析,我们发现了在转录水平响应铝胁迫的花粉类受 体蛋白激酶基因 AhPRK4,为探究 AhPRK4 在花生铝胁迫中的功能,该文进一步分析了铝 胁迫处理下 AhPRK4 在花生耐铝品种99-1507和铝敏感品种中花 2 号(ZH2)根尖中的 转录变化,通过序列分析、进化树构建等分析了 AhPRK4 的蛋白结构特点和亲缘关系,克 隆了 AhPRK4 的胞内域序列(AhPRK4-CD),并通过原核表达和体外磷酸化体系分析了 AhPRK4-CD 的自磷酸化活性。结果表明:(1)不同铝处理时间及不同铝浓度处理后, AhPRK4 的转录水平上调,显著响应铝处理,是铝诱导基因;(2)AhPRK4 含有 673 个氨 基酸,属于 LRR-III 蛋白激酶家族成员,具跨膜域和信号肽,且预测具有磷酸化活性位点; (3)体外诱导表达出约 71 kD 的可溶性蛋白(GST-AhPRK4-CD),经凝胶亲和层析纯化, 得到基于蛋白印迹实验(Western Blot)验证正确的重组蛋白,重组蛋白可发生磷酸化修饰, 但无明显的自磷酸化现象。综上认为,AhPRK4 是一个铝胁迫应答基因,参与花生铝胁迫 早期应答机制,且能发生磷酸化修饰。

  • 油脂类型对肉鸡不同组织甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因相对量的影响

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: 本试验旨在探究油脂类型对肉鸡不同组织甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因相对表达量的影响。试验选用240只1日龄的科宝肉鸡母雏,随机分为8个组(4个单一油脂组,分别在饲粮中添加5.00%亚麻油、玉米油、芝麻油和猪油;4个混合油脂组,分别在饲粮中添加2.50%猪油+2.50%玉米油、2.50%猪油+2.50%芝麻油、2.50%亚麻油+2.50%玉米油和2.50%亚麻油+2.50%芝麻油),每组6个重复,每个重复5只鸡。试验期42 d。结果表明:1)组织及油脂类型与组织的交互作用对42日龄肉鸡组织GAPDH基因的相对表达量影响显著(P0.05)。42日龄肉鸡胸肌GAPDH基因的相对表达量显著高于肝脏和腹脂(P0.05);玉米油组胸肌中GAPDH基因的相对表达量显著高于猪油组(P0.05),但日龄对肉鸡肝脏GAPDH基因相对表达量的影响显著(P<0.05)。由此可见,油脂类型对肉鸡GAPDH基因的相对表达量的影响呈现组织间的差异,玉米油可提高胸肌GAPDH基因的相对表达量。42日龄肉鸡胸肌GAPDH基因的相对表达量显著高于肝脏和腹脂,21日龄肉鸡肝脏GAPDH基因的相对表达量显著高于42日龄。

  • 肉鸡WD和肽重复序列结构域1基因组织特性及油脂类型和水平对WD和肽重复序列结构域1基因的影响

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: WD和肽重复序列结构域1(WD and tetratricopeptide repeats 1,WDTC1)基因是调控能量代谢、脂肪沉积和血清甘油三酯水平的关键基因。本试验旨在分析肉鸡WDTC1基因组织表达谱及不同类型和水平的油脂对肉鸡不同组织、不同日龄WDTC1基因表达的影响。随机挑选42日龄商品肉鸡母雏5只,进行WDTC1基因的组织表达谱分析。在此基础上,试验选取240只1日龄科宝肉鸡母雏,随机分为8个组(分别在饲粮中添加2.50%、5.00%的亚麻油、玉米油、芝麻油和猪油),每组6个重复,每个重复5只鸡,分别于21和42日龄时从每个重复随机选取1只肉鸡屠宰取样,通过三因素析因试验设计分析油脂类型、水平和肉鸡组织以及油脂类型、水平和肉鸡日龄对肉鸡WDTC1基因表达的交互效应。结果表明:1)WDTC1基因在肉鸡各个组织中广泛表达,其中在卵巢组织中表达量最高,其次是肝脏、肾脏、脑、肺脏、胸肌、心脏、小肠等组织,在胰腺组织中表达量最低。2)油脂类型对42日龄肉鸡不同组织中WDTC1基因相对表达量的影响极显著(P0.05)。3)油脂类型对不同日龄肉鸡肝脏组织中WDTC1基因相对表达量的影响极显著(P<0.01),且油脂类型与油脂水平的交互效应显著(P<0.05);2.50%和5.00%油脂水平时猪油组21日龄肉鸡肝脏组织中WDTC1基因相对表达量显著高于42日龄时(P<0.05);2.50%油脂水平时亚麻油组肝脏组织中WDTC1基因相对表达量显著高于猪油组(P<0.05),5.00%油脂水平时亚麻油和玉米油组42日龄肉鸡肝脏组织WDTC1基因相对表达量显著高于芝麻油组(P<0.05)。由此可见,肉鸡WDTC1基因的表达有时空特异性,优势表达组织为肝脏,WDTC1基因表达量受油脂类型、肉鸡组织、肉鸡日龄、油脂类型与油脂水平以及油脂类型与肉鸡组织的交互影响。

  • 肉鸡WD和肽重复序列结构域1基因组织特性及油脂类型和水平对WD和肽重复序列结构域1基因的影响

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: WD和肽重复序列结构域1(WD and tetratricopeptide repeats 1,WDTC1)基因是调控能量代谢、脂肪沉积和血清甘油三酯水平的关键基因。本试验旨在分析肉鸡WDTC1基因组织表达谱及不同类型和水平的油脂对肉鸡不同组织、不同日龄WDTC1基因表达的影响。随机挑选42日龄商品肉鸡母雏5只,进行WDTC1基因的组织表达谱分析。在此基础上,试验选取240只1日龄科宝肉鸡母雏,随机分为8个组(分别在饲粮中添加2.50%、5.00%的亚麻油、玉米油、芝麻油和猪油),每组6个重复,每个重复5只鸡,分别于21和42日龄时从每个重复随机选取1只肉鸡屠宰取样,通过三因素析因试验设计分析油脂类型、水平和肉鸡组织以及油脂类型、水平和肉鸡日龄对肉鸡WDTC1基因表达的交互效应。结果表明:1)WDTC1基因在肉鸡各个组织中广泛表达,其中在卵巢组织中表达量最高,其次是肝脏、肾脏、脑、肺脏、胸肌、心脏、小肠等组织,在胰腺组织中表达量最低。2)油脂类型对42日龄肉鸡不同组织中WDTC1基因相对表达量的影响极显著(P0.05)。3)油脂类型对不同日龄肉鸡肝脏组织中WDTC1基因相对表达量的影响极显著(P<0.01),且油脂类型与油脂水平的交互效应显著(P<0.05);2.50%和5.00%油脂水平时猪油组21日龄肉鸡肝脏组织中WDTC1基因相对表达量显著高于42日龄时(P<0.05);2.50%油脂水平时亚麻油组肝脏组织中WDTC1基因相对表达量显著高于猪油组(P<0.05),5.00%油脂水平时亚麻油和玉米油组42日龄肉鸡肝脏组织WDTC1基因相对表达量显著高于芝麻油组(P<0.05)。由此可见,肉鸡WDTC1基因的表达有时空特异性,优势表达组织为肝脏,WDTC1基因表达量受油脂类型、肉鸡组织、肉鸡日龄、油脂类型与油脂水平以及油脂类型与肉鸡组织的交互影响。

  • 差异基因谱分析颈动脉不稳定斑块相关基因及可能的信号通路

    分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

    摘要: 目的探讨颈动脉不稳定斑块发生的分子机制。方法从ArrayExpress数据库下载基因表达谱数据E-MTAB-2055。该数据包含24例颈动脉不稳定斑块和24例稳定斑块组织,从中筛选差异基因,并通过富集分析获取与不稳定斑块有关的生物学过程和通路。同时,通过构建差异表达基因的生物网络来寻找与该疾病高度相关的风险模块,并用荧光定量PCR法检测五对不稳定斑块和斑块旁标本,验证风险模块中部分基因的差异表达。结果不稳定斑块中发生显著性差异表达变化的基因共有439个,其中上调基因为232个,下调基因为207个。涉及到的生物学过程和通路大部分与炎症和免疫应答有关。生物网络和模块分析提示CXCR4 , V CL和TYROBP可能在不稳定斑块发生发展过程中发挥着重要作用。荧光定量PCR结果显示CXCR4和TYROBP基因表达情况与芯片数据分析结果一致。结论本研究比较完整地揭示了不稳定斑块差异表达谱特征和所涉及的生物学过程和信号通路,其中TYROBP可能是不稳定斑块发生发展进程中新的致病基因。

  • 人源CT55蛋白原核及单克隆抗体的制备

    分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

    摘要: 为制备Cancer testis 55(CT55)单克隆抗体,需构建带有人源CT55片段的原核表达质粒,把该质粒转化Rosetta感受态进行原核表达并得到目的蛋白,蛋白被纯化后免疫6w雌性BALB/c小鼠。按传统的单克隆抗体的制备方法,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合,经ELISA方法筛选及两次连续亚克隆,共获得多株能稳定分泌抗 CT55蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,如3D8B7B12、4C8E1C9、3D8C10G9等。ELISA及Western Blot(WB)分析结果表明,筛选的细胞株均能产生单克隆抗体,且该抗体均分别能与原核表达及真核表达的CT55蛋白发生特异性结合。单克隆抗体可用于免疫荧光试验,且与P53发生互作的荧光主要位于细胞核边缘。结果表明,本研究成功制备了针对人源CT55 蛋白的单克隆抗体。CT55蛋白单克隆抗体的制备为今后肝癌、胃癌、结肠癌等癌症的快速的病原学诊断以及 CT55蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。

  • microRNA在反刍动物中的研究进展

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: 微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度在22个核苷酸左右的小分子非编码RNA,通过与3'端非翻译区的碱基配对靶向调节mRNA的表达从而抑制其翻译或降解。miRNA广泛存在于动物和植物中,可以参与调节多种发育调控和生物学过程,本文在总结miRNA的来源、作用机制、预测方法及其基因表达与功能的基础上,综述了其在反刍动物中的研究进展。

  • 基于IRES序列的多基因共载体构建

    分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

    摘要: 目的:构建一个IRES序列介导的多基因共表达载体,实现两个目的基因和筛选标记基因共用一个启动子高效表达,提高多基因稳定共表达细胞株的筛选效率。方法:以实验室前期构建的载体pLV-MCS-Puro为骨架,设计并全基因合成双基因克隆表达元件,连接到骨架载体,构建多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,以DsRed2和EGFP荧光蛋白基因验证该载体用于多基因稳定共表达细胞株筛选的效率。结果:成功构建了pLV-2MCS-Puro载体以及DsRed2和EGFP共表达重组质粒pLV-DsRed2-EGFP-Puro。瞬时转染实验证明该载体能介导多基因共表达。抗性筛选获得了MDCK和Hela两种细胞的多基因稳定共表达细胞池。细胞池涂片荧光显微镜观察和计数表明抗性细胞池DsRed2和EGFP双阳率接近100%。基因组和转录水平PCR及蛋白免疫印迹实验表明DsRed2和EGFP稳定整合到抗性细胞基因组并且两种蛋白表达水平较为一致。结论:成功构建了多基因共表达载体pLV-2MCS-Puro,实现了两个目的基因和抗性基因串联共表达,并且具有高效的多基因稳定共表达细胞株筛选效率。该载体在研究蛋白相互作用以及工程细胞构建等方面具有一定的应用前景。

  • 木聚糖酶异源的研究进展

    分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2019-02-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

    摘要: 摘要:木聚糖(Xylan)在自然界中的含量极其丰富,在农作物和农林剩余物中大量存在。随着能源资源问题的日益凸显,对木聚糖的应用和研究越来越受到重视。木聚糖酶(Xylanase)是可以将木聚糖降解为低聚木糖和木糖的一类水解酶,近年来,为了实现木聚糖酶的高产、高酶活表达,科研工作者做了大量的研究工作,本文将就木聚糖酶异源表达(Heterologous expression)的研究进展进行综述。 关键词:木聚糖;木聚糖酶;异源表达

  • 盲肠灌注丙酸对生长猪结肠黏膜基因的影响

    分类: 生物学 >> 动物学 提交时间: 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》

    摘要: 本试验旨在通过盲肠灌注丙酸,利用转录组测序,探究丙酸对生长猪结肠黏膜基因表达的影响。试验选取16头杜×长×大阉公猪,随机分成对照组和试验组,每组8头。试验期内,通过盲肠瘘管给对照组和试验组试验猪分别灌注等量的生理盐水及用生理盐水配制的丙酸溶液,共灌注28 d。试验期结束后屠宰,采集结肠黏膜进行转录组测序分析。结果显示:灌注丙酸后,在生长猪结肠黏膜中共检测出121个差异表达基因(FC≥2,P<0.05),其中78个基因上调,43个基因下调。其中,丙酸显著提高了酪酪肽(PYY)、胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBR7)、果糖二磷酸醛缩酶(ALDOB)、ATP合成酶5I(ATP5I)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基4L(ND4L)、细胞色素P450(CYP39A1)等与糖代谢和能量代谢相关基因的表达(P<0.05),显著促进了Occudin-1、生长抑素(SST)、G蛋白偶联受体5A(GPRC5A)等免疫相关基因的表达(P<0.05)。经GO与KEGG pathway分析发现,上调基因显著富集的GO term主要包括糖基化合物代谢、糖类衍生物代谢等,显著富集的通路有氧化磷酸化、糖胺聚糖生物合成等。下调基因显著富集的GO term主要有心腔发育、干细胞群维持等,显著富集的通路包括牛磺酸和亚牛磺酸代谢、叶酸生物合成等。综上所述,盲肠灌注丙酸改变了结肠糖代谢和能量代谢,以及肠道屏障与免疫功能相关基因的表达,表明丙酸对结肠代谢及机体健康有一定的调节作用。