分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 自噬是机体维持自身稳态的一种重要生理活动，当体内氨基酸或葡萄糖等营养缺乏时，细胞会启动自噬。自噬受到多种信号通路的调节，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体C1（mTORC1）信号通路是其中重要的一条，它可以使自噬相关基因13（Atg13）磷酸化，抑制自噬起始。本文将围绕近年来报道的氨基酸缺乏诱导细胞自噬的mTORC1信号通路，包括小G蛋白、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、微小RNA(miRNA)、氨基酰-tRNA合成酶在其中的作用等研究进展进行综述。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2022-07-26 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 心血管疾病是全球人类死亡的主要原因。自噬是一种高度保守的新陈代谢途径，其中溶酶体降解细胞器和大分子物质并循环利用，对心血管稳态和功能至关重要，但过度或不足的自噬可导致心血管疾病。越来越多研究证明，运动是预防和改善心血管疾病预后的重要组成部分。运动调节自噬是双向和动态的过程。对于自噬过度或不足引起的心血管疾病，运动可恢复自噬水平及功能，延缓心血管疾病的进展，改善心室重构。探究运动对心血管疾病自噬的调节机制有益于改善预后，降低心血管疾病事件发生率，提高生活质量。本综述回顾自噬的主要作用机制及信号通路，以及运动调节自噬有益于改善心血管疾病预后作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：本文旨在探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型（PKM2）对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法：将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株（shPKM2组），同时设立空载体转染组为对照（Vector组）。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和shPKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化；CCK-8实验检测细胞体外增殖能力；流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况；Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果：在稳定干扰PKM2后，PKM2的mRNA（t=11.58，P=0.0003）和蛋白水平（t=11.88，P=0.0003）均明显降低。与Vector组比较，shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低（F=118.87，P＜0.0001）。同时，干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期，细胞凋亡率显著增加（t=37.23，P＜0.0001）；使促凋亡蛋白Bax表达增加（t=15.36，P=0.0001）、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低（t=9.965，P=0.0006）。此外，干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平，表现为LC3II降低（tLC3II=10.32，PLC3II=0.0005），而p62水平增加（tp62=14.59，Pp62=0.0001）。还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱（F=96.32，P＜0.0001）。结论：以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡，其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关，提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-03-05 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 【目的】 通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用，探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。【方法】 生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7，通过成功构建载体ATG7野生型（pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT）和突变型，利用双荧光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系，同时构建结核分枝杆菌（H37Ra）感染的人源性THP-1巨噬细胞模型，将做不同处理的细胞分为三组：miR-17-5p mimics，miR-17-5p inhibitor，miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响，并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。【结果】 MTB感染能够引起miR-17-5p的下调，随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性，双荧光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合，并对其进行负调控。进一步通过Western blot，免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调，自噬小体表达降低，而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较，ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。【结论】 miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3'UTR抑制自噬，在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 真核细胞内膜系统由细胞内相互联系的膜状细胞器组成，包括外泌体的生成和自噬过程，对应激反应和维持细胞内稳态起着重要作用。外泌体是含有蛋白质与核酸内容物的多泡体分泌到体外形成的胞外囊泡，而自噬是溶酶体依赖性的降解和循环再利用的过程。研究发现，外泌体的生成和自噬之间有着共同的分子机制，二者存在实质性的交互通讯。本文对外泌体的生成和自噬的过程，包括二者与溶酶体之间的关系进行综述。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的:探索丝胶蛋白对胃癌MKN45细胞增殖活性的影响及作用机制。方法用LC3双荧光自噬病毒转染胃癌MKN45细胞，用嘌呤霉素筛选LC3双荧光自噬病毒的MKN45稳转株。实验分为3组，空白对照组（Blank）、丝胶蛋白阳性组（Sericin）、丝胶蛋白加自噬抑制剂组（Sericin+3-MA）。培育48 h后用cck-8试剂测定细胞增殖活性，根据所测数据得出丝胶蛋白半数致死浓度IC50，按此浓度处理细胞并培育48h，用流式细胞仪分别检测凋亡、周期，电镜检测细胞自噬，Western blotting检测LC3、p62、Beclin蛋白表达。将种植胃癌的裸鼠分为2组，即对照组（Saline）、丝胶蛋白阳性组（Sericin），每组5只；分别注射生理盐水和丝胶蛋白，测量肿瘤体积和质量。结果丝胶蛋白阳性组（Sericin）与空白对照组（Blank）相比，MKN45细胞增殖活性明显受到抑制，且细胞凋亡增加（P<0.01），细胞阻滞于G2/M期（P<0.01）。相对于空白组，丝胶蛋白处理后细胞在电镜观察到自噬小体明显增多；Western blotting检测到LC3-2 表达上调，Beclin表达增加，p62表达逐渐下调；丝胶蛋白加自噬抑制剂组（Sericin+3-MA）实验结果则介于两者之间。动物实验中，丝胶蛋白阳性组（Sericin）与对照组（Saline）相比，肿瘤体积和质量有显著下降。结论丝胶蛋白可通过调控胃癌MKN45细胞自噬影响细胞增殖活性。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat，PCDH-Duo) , 并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264.7稳转株观察自噬流变化。方法 应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因，将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中，重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后, 包装慢病毒，转染Raw264.7细胞，并利用流式分选术获取稳转株，经氯喹抑制自噬模型及Western blotting鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果 成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒，包被慢病毒并获得Raw264.7稳定细胞系(Raw264.7-PCDH-Duo)，可稳定表达双荧光蛋白，经3 mM氯喹作用6h后，能够稳定准确指示自噬流变化。结论 成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统，为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-11 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 自噬是细胞依赖溶酶体对蛋白质和细胞器进行降解的过程，能帮助细胞适应各种不良刺激，在维持细胞内环境稳态和实现自我更新中起着重要作用。氧化应激是机体氧化和抗氧化系统之间的稳态被破坏而造成的应激状态。大量研究表明，氧化应激中产生的活性氧能诱导自噬产生，而自噬能缓解氧化应激造成的损伤，从而保护细胞存活。本文主要对自噬的形成过程、氧化应激诱导自噬产生机制以及自噬缓解氧化应激的途径等进行综述，以期为畜牧生产中通过调控自噬缓解氧化应激提供理论依据。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 自噬是真核生物普遍存在的通过溶酶体降解错误折叠的蛋白质、异常的细胞器从而循环利用自身内含物的重要生理过程。细胞自噬广泛参与多种病理和生理过程，是当前生物医学领域研究的热点之一。自噬的分子机制能够揭示自噬本质，不仅有利于理解自噬的生理意义，也有利于寻找新的药物靶点为治疗疾病提供理论基础。金属离子能通过不同的信号通路诱导自噬，其研究对药物开发和疾病治疗具有重要的意义。本综述主要从自噬的分子机制、金属离子的诱导作用两方面进行阐述。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨巴弗洛霉素A1对抑制胃癌细胞自噬、增殖、侵袭、凋亡和奥沙利铂敏感性的影响。方法 将胃癌MGC-803细胞分为空白对照组（Control组）、巴弗洛霉素A1组（BAF组）、奥沙利铂组（OXA组）及巴弗洛霉素A1+奥沙利铂（O+B组）。分别采用 MTT法、平板克隆形成实验检测细胞增殖活力；Elisa法检测细胞核小体表达水平；Transwell法检测细胞运动能力；扫描电镜、免疫组化及Western blot检测自噬水平；Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果 BAF组与Control组相比自噬水平显著降低，BAF组增殖活力、迁移细胞数及侵袭细胞数显著低于Control组（P=0.000），核小体和Bax表达显著高于Control组（P=0.000），Bcl-2表达低于Control组（P=0.046）。O+B组与OXA组相比自噬水平显著降低，此时O+B组细胞增殖活力、迁移细胞数及侵袭细胞数显著低于OXA组（P=0.000），凋亡率显著高于OXA组（P=0.000），Bcl-2相对表达量显著低于OXA组（P=0.001），Bax相对表达量显著高于OXA组（P=0.000）。结论 巴弗洛霉素A1通过抑制自噬能够显著抑制胃癌MGC-803细胞的增殖和运动能力，促进凋亡，而且能增强奥沙利铂的药物敏感性。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-21 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨自噬在法舒地尔（Fasudil）抑制Rho激酶心肌保护中的变化，并分析其作用及可能机制。方法 离体大鼠心脏Langendorff装置灌流，结扎冠状动脉左前降支30 min模拟局部心肌缺血，松开结扎线恢复灌流120 min复制心肌缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）模型。实验分3组：I/R组、法舒地尔（Fasudil）组、和Fasudil+自噬抑制剂渥曼青霉素（Wort）组。连续记录左心室动力学变化，收集再灌注5、10 min冠脉流出液测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）含量；RT-PCR检测自噬相关基因Atg5、Beclin1和凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化，Western blotting检测caspase 3的表达变化。结果 与I/R组比，Fasudil使左心室发展压、左心室内压最大上升及下降速率、左心室做功明显得到改善，降低复灌期冠脉流出液中LDH的释放，Atg5、Beclin1 mRNA表达增加，Bcl-2/Bax mRNA升高，caspase 3蛋白表达降低。自噬抑制剂Wort减弱了法舒地尔的保护作用，抑制了心室动力学指标的恢复，LDH释放增多，Atg5和Beclin1 mRNA表达降低，Bcl-2/Bax降低，caspase 3蛋白表达升高。结论 抑制Rho激酶心肌保护作用中诱导了自噬的发生，且自噬起到保护心肌的作用，可能与减少细胞凋亡有关。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-11-23
摘要： 脓毒症是一种由感染引起的器官功能障碍综合征，具有发病率高、致死率高的特点，发病机制复杂，可触发连锁的免疫反应，且暂无特效药物。目前，脓毒症的治疗多采用抗生素、血流动力学管理、机械通气等西医支持治疗，但随着免疫连锁反应的出现，患者对继发感染的易感性显著增加，极易发展为脓毒症休克，预后较差。国际共识提出，在脓毒症确诊后的48小时内启动对患者免疫功能的动态监测可有效减缓脓毒症进程。大量研究指出，巨噬细胞作为先天免疫系统抵御病原体的第一道防线，可通过调控极化与细胞因子的激活比例，在多种免疫系统疾病的治疗中发挥重要作用。而线粒体自噬作为近年来的研究热点，越来越多的证据表明，其在炎症信号传导的调节中起着关键作用。一方面，在炎症风暴期，促进线粒体自噬可减轻脓毒症不受控制的感染和过度炎症；另一方面，在免疫抑制期，抑制线粒体自噬可提高机体免疫力，促进清除细菌并提高患者存活率。值得注意的是，中医作为祖国传统医学，其“治未病”的思想传承与现行脓毒症专家共识中“预防与阻断”的理念不谋而合。中药单体、复方及针灸等中医药治疗手段，从清热解毒、活血化瘀、扶正固本、通里攻下的治法入手，双向调节线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3、P62等的水平，动态平衡巨噬细胞M1与M2的比例，达到预防、扭转甚至截断脓毒症病情进展的效果，为脓毒症提供了一个未病先防、既病防变的新思路。
分类： 心理学 >> 社会心理学 提交时间： 2023-03-28 合作期刊: 《心理科学进展》
摘要： 长时记忆在激活后首先会变得不稳定(去稳定过程), 继而会经历一个再巩固过程重新稳定下来以维持记忆的关联性。在再巩固期间给予电击、药理或行为训练以干预记忆再巩固, 可以更改原有记忆的强度或内容。这有望成为临床上治疗病理性记忆的一种方法。然而, 一些边界条件(记忆痕迹强、时间久远等)导致记忆在简单激活后不能去稳定, 不会经历再巩固过程, 使干预再巩固的方法无法发挥作用。动物实验表明, 通过药理学地调控参与记忆去稳定的分子的活动以促进记忆去稳定, 可以成功克服边界条件。可见, 边界条件不是绝对的。未来研究可进一步探索更多、更优的促进记忆去稳定并克服边界条件的方法, 提升干预记忆再巩固疗法的临床应用潜能。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 细胞自噬是一种进化上高度保守的胞内降解系统，旨在实现维持细胞稳态以应对不同的细胞应激。在生理状态下，细胞自噬水平通常较低；而在氧化应激、营养饥饿和各种病原体刺激下会显著上调。过去的许多研究都表明细胞自噬在多种组织细胞和生理功能调控中有重要意义。早期研究发现了细胞自噬和中性粒细胞死亡之间的联系，这是与炎症密切关联的必要过程。在人类系统和小鼠模型中表明，细胞自噬在中性粒细胞驱动的炎症和防御病原体方面起着至关重要的作用。细胞自噬对于中性粒细胞主要功能的发挥至关重要，包括脱颗粒，活性氧产生和中性粒细胞胞外诱捕网的释放。骨髓中的中性粒细胞生成，自噬在骨髓细胞生成中发挥关键作用，以及促使髓系祖细胞向中性粒细胞分化。总之，本综述集中讨论了细胞自噬对中性粒细胞的作用，从中性粒细胞在骨髓中产生到炎症反应和NETosis细胞死亡。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2022-08-01 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 【摘要】目的 探讨银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract, GBE）通过磷脂酰肌醇3-激酶( PI3K) /蛋白激酶B( Akt) /哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)信号通路调控肺泡巨噬细胞自噬防治慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）的作用机制。方法 将90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD 模型组、GBE组、康士得组、雷帕霉素组、Taselisib组，每组各15只，除正常对照组外，其余各组采用香烟熏吸联合气管内注入脂多糖（LPS）的方法构建COPD大鼠模型，GBE组于实验的第15d-28d腹腔注射舒血宁注射液，其余各组于实验的第29d-42d分别予Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素、PI3K抑制剂Taselisib干预；显微镜下计数各组大鼠肺泡巨噬细胞数量，HE染色观察各组大鼠肺泡病理改变及气道重塑情况，透射电镜观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的超微结构，酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠肺泡灌洗液（BALF）与血清白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-8（IL-8）水平；蛋白免疫印迹法（WB）检测各组大鼠肺泡巨噬细胞PI3K p110a、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、LC3 II/LC3I蛋白表达水平。结果 GBE组和各抑制剂组肺泡巨噬细胞数量明显小于COPD模型组（P＜0.05）；GBE组和各抑制剂组的肺泡平均内衬间隔(MLI)与平均肺泡面积 (MAA)明显小于COPD模型组，而平均肺泡数(MAN)明显大于COPD模型组（P＜0.05）；与COPD模型组相比GBE组与各抑制剂组大鼠支气管壁结构基本完整，纤毛排列较整齐，支气管管壁及其周围炎症细胞浸润较少；透射电镜观察发现GBE组与各抑制剂组肺泡巨噬细胞的自噬溶酶体较COPD模型组明显增多；与COPD模型组相比，GBE组与各抑制剂组BALF与血清中IL-6、IL-8含量明显降低（P＜0.05），PI3K p110a、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平明显降低（P＜0.05），而LC3-II/LC3I的比值明显升高（P＜0.05）。结论 GBE能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路，维持COPD大鼠肺泡巨噬细胞的自噬功能，减轻巨噬细胞浸润，抑制炎症反应、肺泡破坏，改善气道重塑。
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