长链非编码RNA PVT1通过ERα-BTG2轴促进ER α阳性乳腺癌细胞增殖 后印本

摘要: 背景  浆细胞瘤变异易位基因1（PVT1）是一种长链非编码RNA，在乳腺癌等多种癌症的发生和发展中起着关键作用。雌激素受体α阳性（ERα+）乳腺癌是最主要的乳腺癌亚型，约占所有病例的70%。然而，PVT1在该亚型中的作用及其潜在机制尚未明确。目的  探究PVT1在ERα+乳腺癌中的临床意义和生物学作用。方法  从癌症基因组图谱（TCGA）中获取1 095例乳腺癌组织（包括771例Luminal亚型、82例HER2亚型、190例Basal亚型和40例Normal亚型）和113例癌旁组织的基因表达和临床数据，从基因表达综合数据库（GEO）中获取数据集GSE29431（54例乳腺癌组织和12例癌旁组织）和GSE70947（148例乳腺癌组织和148例癌旁组织）的表达数据，分析PVT1在乳腺癌及不同亚型中的表达水平，并利用R4.3.3软件和Kaplan-Meier Plotter在线网站分析PVT1在乳腺癌预后中的意义。采用小干扰RNA（siRNA）处理ERα+乳腺癌细胞系MCF7，通过细胞增殖检测试剂盒（MTS法）、平板克隆实验及5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）实验检测敲低PVT1对细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western Blotting检测敲低PVT1对雌激素信号通路的影响，以及PVT1对ERα和B细胞易位基因2（BTG2）的调控作用。同时敲低PVT1和BTG2，通过MTS法、平板克隆实验及EdU实验验证ERα-BTG2轴在PVT1调控细胞增殖中的作用。结果  基于TCGA和GEO数据库分析结果显示，乳腺癌组织中PVT1表达水平均高于癌旁组织（P<0.01），且PVT1在ERα+组中的表达水平高于ERα- 组（P<0.001）。PVT1高表达组ERα+乳腺癌患者的总生存率和无复发生存率均低于低表达组（P<0.05）。SiRNA干扰后，敲低PVT1（Si-PVT1）组的细胞活力（48h和72h）、克隆数量和EdU阳性细胞比例均低于阴性对照（NC）组（P<0.05）；Si-PVT1组雌激素通路下游基因三叶因子1（TFF1）和生长调节雌激素受体结合蛋白1（GREB1）的mRNA表达均低于NC组（P<0.01），ERα蛋白表达量低于NC组（P=0 .009）。采用300 µM蛋白合成抑制剂环己酰亚胺（CHX）分别孵育MCF7细胞0、8、16、24和32h，从16h开始，Si-PVT1组ERα的蛋白相对表达量均低于相应时间点的NC组（P<0.05）。此外，Si-PVT1组BTG2的mRNA和蛋白表达均高于NC组（P<0.05）。分别采用1‰DMSO和2 µM mRNA合成抑制剂放线菌素D（ActD）预处理MCF7细胞1 h，DMSO处理后Si-PVT1组BTG2 mRNA表达高于NC组（P=0 .012），而ActD处理后Si-PVT1组和NC组BTG2mRNA水平比较，差异无统计学意义（P=0 .622）。回复实验表明，同时敲低PVT1和BTG2（Si-PVT1+Si-BTG2）组细胞活力、克隆数量和EdU阳性细胞比例均高于Si-PVT1组（P<0.05）。结论  PVT1通过维持ERα蛋白稳定性和抑制BTG2表达促进ERα+乳腺癌细胞增殖。