益气除痰法通过减轻炎症浸润缓解肿瘤性骨骼肌损伤的研究 后印本

摘要: 背景　肿瘤患者常出现肌肉减少等症状，但其病理学机制未完全明确。目的　探讨肿瘤性骨骼肌损伤的病理学机制并研究益气除痰法对肿瘤性骨骼肌损伤的干预作用。方法　于2020年10月—2021年5月，采用8周龄雌性C57BL/6小鼠共30只，随机选取20只小鼠通过皮下注射LLC细胞构建荷瘤小鼠模型，造模成功后分为肿瘤组（n=10）和益气除痰法组（YQCT组，n=10）以及对照组（n=10），YQCT组予以益肺散结丸灌胃处理（3g·kg-1·d-1），对照组和肿瘤组给予等体积生理盐水处理，共21 d。末次给药24 h后，采用旷场试验和高架十字迷宫实验进行行为学评估；采集腓肠肌组织进行组织病理学分析，观察腓肠肌组织病理损伤变化；采用转录组学分析，观察差异表达基因；采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测组织炎症因子水平。取对数生长期的RAW264.7细胞，随机分为小鼠血清对照组（RAW264.7组）、小鼠肿瘤血清组（RAW264.7-LPS组）和小鼠益气除痰法血清组（YQCT组），RAW264.7组使用含10%的对照组小鼠血清的培养基、RAW264.7-LPS组使用含10%的肿瘤组小鼠血清+100 ng/mL LPS的培养基、YQCT组使用含10%的YQCT小鼠血清+100 μg/L LPS的培养基处理24 h，采用ELISA检测RAW264.7的炎症因子水平。上述处理后的RAW264.7细胞与小鼠C2C12细胞共培养48 h后，采用溶酶体红色荧光探针试剂盒检测C2C12细胞的自噬溶酶体水平。结果　三组小鼠旷场实验和高架十字迷宫实验总运动路径比较，差异有统计学意义（P<0.001），其中肿瘤组低于对照组，YQCT组高于肿瘤组（P<0.001）；病理学结果显示，与对照组相比，肿瘤组肌细胞出现明显的损伤，而YQCT组损伤程度降低；转录组学分析结果显示，对照组和YQCT组基因表达趋势较为统一，肿瘤组基因表达趋势则与之相反。免疫荧光染色结果显示，与对照组相比，肿瘤组腓肠肌中M1型巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞的浸润增加；与肿瘤组相比，YQCT组M2型巨噬细胞的浸润增加，其他促炎细胞的浸润减少。ELISA检测结果显示，肿瘤组IL-1β、IL-6和TNF-α的水平高于对照组，YQCT组IL-1β、IL-6和TNF-α的水平低于肿瘤组（P<0.001）。细胞实验结果显示，RAW264.7-LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α的水平高于对照组，YQCT组IL-1β、IL-6和TNF-α的水平低于RAW264.7-LPS组（P<0.001），且活化的RAW264.7细胞能导致C2C12细胞自噬溶酶体增多。结论　益气除痰法减少肿瘤所致的骨骼肌炎症细胞浸润，从而减轻骨骼肌炎症性损伤，保护荷瘤小鼠的运动功能。