分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探究小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制，为钙化性主动脉瓣膜病（calcific aortic valve disease，CAVD）的干预及治疗提供理论依据。 方法：非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者，CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者，采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶，采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞，观察其形态特征，并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞，采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化，建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后，采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果：BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞，α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及波形蛋白（vimentin）染色阳性，血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白水平均明显下调，早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达，可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白表达，且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论：BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力，BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的在黑色素瘤的小鼠模型上，探讨高强度聚焦超声(HIFU)处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7-10 mm时进行HIFU处理，并设置实验对照组(荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭，即假照组);治疗后每3d测量肿瘤长径和短径，共观察3周，绘制肿瘤曲线，统计生存率和转移率，并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色素瘤细胞的数量，它们分别是黑色素瘤相关抗原A3 ( MAGE-A3 ) ,T细胞1识别的黑色素瘤抗原(MART 1)以及同源转化成对框基因转录因子PAX3);在HIFU治疗后14d，通过尾静脉注射再次移植B 16-F 10细胞，观测其肺转移率。结果(1)各自的中位生存时间及95%可信区间(CI):假照组分别为19.00 d和17.14-20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76-27.25 d，生存率差异显著(P<0.01);从治疗后第20天起，两组小鼠的肿瘤体积差异明显，从HIFU处理后第20天开始，包括处理后第23,26天，辐照组小鼠肿瘤体积明显小于假照组(P<0.05); (2)实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3 , MART 1和PAX3三个指标都明显低于假照组(P<0.05 )，在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组(P<0.05 ) ; (3 )在HIFU治疗后14d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞，HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组(P<0.05 )，肿瘤转移抑制率为42.4%。结论HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生，其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在肺部的定植能力。
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