四妙汤对类风湿关节炎大鼠维生素 D 系统及中性粒细胞胞外诱捕网的影响研究

分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-08-10 合作期刊: 《中国全科医学》

罗书曼 朱星 陈帅 李文 董右青 何昌禄 周艳 陈云志

摘要： 背景　随着我国进入人口老龄化加速发展期，类风湿关节炎（RA）患病比例不断增加，给社会和家庭造成沉重负担。四妙汤中药物的有效成分确有改善 RA 的作用，但分析方剂的作用及机制缺乏相关研究。目的　观察四妙汤对胶原诱导法（CIA）建立的类风湿关节炎大鼠的干预效果及其对维生素 D 系统及中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的影响。方法　2021 年 11 月2023 年 1 月选取 SPF 级 6 ～ 7 周龄 SD 雌性大鼠 70 只，采用随机数字表法将大鼠随机分为空白组（Control 组）、模型组（Model 组）、甲氨蝶呤组（MTX 组）、维生素 D 组（VD 组）、四妙汤低剂量组（SMT-L 组）、四妙汤中剂量组（SMT-M 组）、四妙汤高剂量组（SMT-H 组），每组 10 只。通过胶原诱导法建立滑膜型关节炎（CIA）大鼠模型，于造模 7 d 后开始灌胃治疗。观察药物干预前后大鼠体质量、一般状况，评估踝部肿胀程度，测量各组大鼠关节炎指数（AI）评分。药物干预结束后采用苏木素 - 伊红（HE）染色观测大鼠关节组织病变情况。采用免疫组化法检测滑膜组织髓过氧化物酶（MPO）、肿瘤坏死因子 （TNF-）表达情况，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清中白介素 6（IL-6）、25- 羟基维生素 D〔25（OH）D3〕、NETs 水平，蛋白质印迹法（Western Blot）检测关节滑膜组织 24- 羟基化酶（CYP24A1）、1- 羟化酶（CYP27B1）、MPO、维生素 D 受体（VDR）、弹性蛋白酶（NE）表达水平。结果　药物干预第 7 天 VD 组、SMT-L 组、SMT-H 组大鼠体质量高于 Model 组，第 14 天 Control 组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-H 组高于 Model 组，第 21、28 天 Control组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组高于 Model 组，差异有统计学意义（P<0.05）。药物干预第0 天 Model 组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组大鼠踝部肿胀程度高于 Control 组，第 7 天 Control组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组低于 Model 组，第 14 天 Model 组高于 Control 组，SMT-M 组高 于 Model 组， 第 21 天 Model 组 高 于 Control 组、MTX 组， 低 于 VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组， 第 28天 Control 组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组低于 Model 组，差异有统计学意义（P<0.05）。第14 天 SMT-H 组大鼠 AI 评分低于 Model 组，第 21 天 MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-H 组低于 Model 组，第 28 天MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组 o、SMT-H 组低于 Model 组，差异有统计学意义（P<0.05）。Model 组大鼠滑膜组织衬里下层大量炎性细胞浸润、滑膜细胞异常增生、关节面被破坏出现不同程度的纤维组织增生；与 Model 组比较，各给药组大鼠滑膜组织的病理状态均有改善，其中 MTX 组、SMT-H 组改善较为明显。免疫组化法结果显示，7 组大鼠滑膜组织 MPO、TNF- 表达水平比较，差异有统计学意义（P<0.05），其中 Model 组 MPO、TNF- 高于 Control组，MTX 组、VD 组、SMT-H 组 MPO、TNF- 低于 Model 组，SMT-M 组 TNF- 低于 Model 组，差异有统计学意义（P<0.05）。Model 组 IL-6、NETs 高于 Control 组，25（OH）D3 低于 Control 组；MTX 组、VD 组、SMT-H 组 IL-6、NETs 低于 Model 组，25（OH）D3 高于 Model 组；SMT-M 组 NETs 低于 Model 组，差异均有统计学意义（P<0.05）。Model 组 CYP24A1 高于 Control 组、MTX 组、VD 组、SMT-M 组、SMT-H 组，CYP27B1、VDR 低于 Control 组、MTX 组、VD 组、SMT-M 组、SMT-H 组，MPO 高于 Control 组、MTX 组、VD 组、SMT-L 组、SMT-M 组、SMT-H 组，NE 高于Control 组、VD 组、SMT-M 组、SMT-H 组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论　四妙汤可能通过调控维生素 D 系统抑制 NETs 的形成，进而治疗 RA。

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