分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 研究神经生长因子前体(precursor of nerve growth factor, proNGF)促进乳腺癌细胞侵袭的作用与埃兹蛋白(ezrin)表达水平及其567位苏氨酸(Thr567)和477位酪氨酸(Tyr477)的磷酸化的相互关系。方法 用梯度浓度的proNGF(0、2.5、5和10 ng/mL)刺激人乳腺癌细胞系 MDA-MB-231和 MCF-7,用 Transwell侵袭实验检测 proNGF对 MDA-MB-231和 MCF-7侵袭的影响;用免疫印迹法检测 ezrin蛋白的表达水平,ezrin Thr567和 ezrin Tyr477磷酸化水平的变化;在 MDA- MB-231中转染pEnter-His-ezrinY477F质粒(ezrin显性负突变质粒),研究ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中的作用。结果proNGF以浓度依赖的方式促进 MDA-MB-231和 MCF-7的侵袭(P<0.05);proNGF以浓度依赖和时间依赖的方式显著升高ezrin Tyr477磷酸化,而对ezrin蛋白的表达以及其Thr567磷酸化无明显影响;Src激酶特异抑制剂SKI-606显著抑制proNGF对ezrin Tyr477磷酸化的促进作用;转染pEnter-His-ezrinY477F抑制proNGF对MDA-MB-231细胞ezrin Tyr477磷酸化和侵袭能力的促进作用(P<0.05)。结论 ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用;proNGF通过激活Src激酶使ezrin Tyr477发生磷酸化。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 研究Nanog促进乳腺癌细胞侵袭与ezrinT567磷酸化的关系及Nanog调节ezrinT567磷酸化的可能机制。方法 转染靶向Nanog的siRNA敲低乳腺癌细胞Nanog;用transwell法检测乳腺癌细胞侵袭;用免疫印迹检测乳腺癌细胞Nanog、PKCε表达水平和 ezrinT567磷酸化水平;用免疫共沉淀和免疫印迹检测 PKCε和 ezrin蛋白的相互作用。结果 敲低乳腺癌细胞的Nanog,PKCɛ蛋白表达下降、ezrinT567磷酸化水平下降、乳腺癌细胞的侵袭能力下降;敲低 PKCε降低 ezrinT567磷酸化水平;PKCɛ与 ezrin可免疫共沉淀。结论 Nanog可上调 PKCɛ的表达,后者可使ezrinT567磷酸化,这可能是 Nanog促进肿瘤转移的一个新机制。