多发性骨髓瘤细胞通过 PI3K/AKT 信号通路 促进 M2 巨噬细胞极化的机制研究

分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-07-26 合作期刊: 《中国全科医学》

彭逸伦 1，2，李杨 1，2，王晓桃 1，2，3*

摘要： 　背景　多发性骨髓瘤发病率长期居高不下，但目前关于磷脂酰肌醇 -3- 激酶（PI3K）/ 丝氨酸 / 苏氨 酸激酶（AKT）信号通路和 M2 巨噬细胞极化促进多发性骨髓瘤发生进展的研究较少。目的　探讨 M2 巨噬细胞在多 发性骨髓瘤患者中的表达及 PI3K/AKT 信号通路促进 M2 巨噬细胞极化的机制研究。方法　选取 2021 年 10 月2022 年 4 月于桂林医学院附属医院血液内科确诊的多发性骨髓瘤患者 48 例为试验组，选取同期健康志愿者（血液内科骨 髓移植健康供者）30 名为对照组。取 2 组研究对象外周血并分离单个核细胞，流式细胞术检测 M2 巨噬细胞比例。采 用细胞传代培养 RPMI8226 细胞，通过佛波酯分化培养单核巨噬细胞 THP-1 为巨噬细胞。根据实验需要将瘤细胞培养 并采用 siRNA 转染沉默磷酸酶基因（PTEN）分成 3 组：空白组、siRNA-PTEN 实验组、siRNA 对照组；收集以上 3 组 细胞培养基上清液加入巨噬细胞共培养体系后分为 4 组：M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN 上清液组、 siRNA 上清液组。采用 Western Blot 实验检测多发性骨髓瘤细胞培养的空白组、siRNA-PTEN 实验组、siRNA 对照组的 AKT、p-AKT、PI3K-p85、p-PI3K-p85 蛋白表达水平。采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测多发性骨髓瘤细胞 培养的空白组、siRNA-PTEN 实验组、siRNA 对照组的 MMP2、MMP9 的 mRNA 表达水平。采用流式细胞术检测多发 性骨髓瘤上清液共培养的 M0 巨噬细胞组、瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN 上清液组、siRNA 上清液组 M2 巨噬细胞中 特异性抗体 CD163、CD206、F4/80 表达水平。采用荧光定量 PCR 检测多发性骨髓瘤上清液共培养的 M0 巨噬细胞组、 瘤细胞上清液组、siRNA-PTEN 上清液组、siRNA 上清液组 M2 巨噬细胞特异标志物精氨酸酶 1（ARG-1）、白介素 10（IL-10）的 mRNA 表达水平。结果　试验组 M2 巨噬细胞表达水平高于对照组（t=0.855，P<0.001）。Western Blot 结果显示，3 组多发性骨髓瘤细胞 p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85 蛋白表达水平比较，差异有统计学意义（F=11.795， P=0.008；F=24.579，P<0.001）；其中 siRNA-PTEN 实验组中 p-AKT/AKT、p-PI3K-p85/PI3K-p85 蛋白表达水平均高 于空白组和 siRNA 对照组（P<0.05）。荧光定量 PCR 结果显示，3 组多发性骨髓瘤细胞 MMP2、MMP9 的 mRNA 表 达水平比较，差异有统计学意义（F=63.777，P<0.001；F=31.007，P<0.001）；其中 siRNA-PTEN 实验组中 MMP2、 MMP9 的 mRNA 表达水平均高于空白组和 siRNA 对照组（P<0.05）。流式细胞术结果显示，4 组 M2 巨噬细胞特异性 抗体 CD163+F4/80、CD206+F4/80 表达水平比较，差异有统计学意义（F=384.218，P<0.001；F=299.663，P<0.001）； 其中 siRNA-PTEN 上清液组 M2 巨噬细胞特异性抗体 CD163+F4/80、CD206+F4/80 表达水平高于瘤细胞上清液组和 siRNA 上清液组（P<0.05）。荧光定量 PCR 结果显示，4 组 M2 巨噬细胞特异标志物 ARG-1、IL-10 的 mRNA 表达水 平比较，差异有统计学意义（F=19.826，P<0.001；F=34.507，P<0.001）；其中 siRNA-PTEN 上清液组 M2 巨噬细胞 特异标志物 ARG-1、IL-10 的 mRNA 表达水平高于瘤细胞上清液组和 siRNA 上清液组（P<0.05）。结论　多发性骨髓 瘤患者中 M2 巨噬细胞表达上调，多发性骨髓瘤细胞可通过激活 PI3K/AKT 信号通路促进 M2 巨噬细胞极化，调控骨髓 瘤细胞微环境。

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