分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 研究Foxo3a基因对大鼠卵巢颗粒细胞体外发育的调控及其预防顺铂卵巢毒性作用。方法 大鼠原代颗粒细胞体外培养，利用HE染色法及免疫荧光法进行原代颗粒细胞鉴定；构建携带Foxo3a基因的重组腺病毒AD-rFoxo3a，利用RT-PCR及Western-blot法检测Foxo3a表达；实验分为3组：实验组（AD-rFoxo3a组）、阴性对照组（rAD组）及空白对照组（Control组），分别绘制各组细胞生长曲线，Western-blot法检测各组cyclin D1、p27、Bax、Bim蛋白表达，利用流式细胞术、Hoechst33342/PI法分别检测细胞周期及细胞凋亡情况，流式细胞术检测各组细胞加入最适浓度顺铂后细胞凋亡情况。结果（1）体外分离培养大鼠原代卵巢颗粒细胞存活率>90%，细胞纯度>95%；（2）重组腺病毒AD-rFoxo3a感染颗粒细胞36 h后Foxo3a基因在mRNA水平高表达，感染48 h后在蛋白水平高表达；（3）实验组细胞增殖受到抑制，G1期细胞比例及细胞凋亡率较空白对照组及实验对照组增加（P<0.01），后两组差异无统计学意义；（3）实验组Bim、p27、cyclin D1蛋白较对照组高表达，而各组Bax蛋白表达无明显差异；（4）加入顺铂24 h后实验组细胞凋亡率高于空白对照组及实验对照组（P<0.01），后两组细胞凋亡率差异无统计学意义。结论过表达Foxo3a基因在体外可能通过促进cyclin D1和p27蛋白表达诱导大鼠卵巢颗粒细胞静止在G1期，通过增加Bim蛋白表达诱导颗粒细胞凋亡；同时过表达Foxo3a基因在体外不能逆转顺铂导致的颗粒细胞凋亡，其对于卵泡发育的调控及预防顺铂对卵巢的毒性作用还有待体内实验进一步研究。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的合成高特异性靶向NF-kB基因的shRNA腺病毒载体，观察其对体外培养的食蟹猴子宫内膜细胞的增殖活动是否具有直接的抑制效应。方法设计携带有NF-kB-p65基因及空载基因的shRNA腺病毒载体，体外培养食蟹猴子宫内膜细胞，分成实验组及对照组，实验组转染携带NF-kB-p65 shRNA的腺病毒，对照组转染携带空载基因的腺病毒，共培养后观察有关细胞增殖活性如凋亡蛋白及细胞周期的改变情况。结果腺病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致，经包装产生的病毒滴度为1.58x1011U/ml} NF-kB-p65-shRNA腺病毒感染食蟹猴子宫内膜细胞后，实验组子宫内膜细胞凋亡蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P<0.05 );实验组凋亡细胞较对照组明显增多，进人细胞分裂期细胞数明显少于对照组(P<0.05 )。结论携带NF-kB基因的腺病毒体外感染食蟹猴子宫内膜细胞后可加速子宫内膜细胞的凋亡，并抑制子宫内膜细胞的增殖，为后期该基因在食蟹猴子宫内膜异位症模型上的研究提供理论基础。
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