分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的 制备抗埃博拉病毒核蛋白(EBOV NP)单克隆抗体和多克隆抗体,建立针对EBOV NP的ELISA检测方法。方法 以重组EBOV NP免疫动物并制备多克隆抗体和单克隆抗体。在此基础上,通过优化抗体浓度、包被液等条件建立检测EBOV NP的双抗夹心ELISA方法。结果 制备出了兔多克隆抗体,筛选出2株可分泌单克隆抗体的鼠源杂交瘤细胞株。Western Blot实验结果表明兔多抗与鼠单抗的结合区域均为N端1~35氨基酸。通过优化,建立了针对EBOV NP的双抗夹心ELISA检测方法。其线性范围是31.2 -1000 ng/mL,最低检测限为2.6 ng/mL。结论 制备出了抗EBOV核蛋白的高特异性多克隆抗体和单克隆抗体,建立了定量检测EBOV核蛋白的方法。
分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-21 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 介绍PEG6000富集精液来源外泌体的提取和鉴定方法,为精液外泌体相关研究奠定基础。方法 选自南方医科大学南方医院检验中心6名正常志愿者精液,经8% PEG6000富集并多步离心结合超速离心方法获取提取物,然后采用透射电子显微镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,蛋白印迹法检测其蛋白组成成分。结果 提取物呈类圆形、椭圆形囊泡,质膜完整,大小约为30~150 nm,内部含有低电子密度物质,均阳性表达CD63、ALIX、TSG101蛋白,且不含精子细胞内质网Calnexin蛋白。结论 经过对提取物的形态、大小以及其蛋白成分分析证实所提取到的物质为精液来源的外泌体,为后续开展精液外泌体临床及基础研究提供了方法学基础。