Yeast two-hybrid 方法筛选 VISA 相互作用蛋白 后印本

摘要: 病原微生物感染对人类健康构成巨大威胁，先天免疫系统是生物体在长期进化过程中建立起来的天然保护系统。 VISA （ MAVS, CARDIF, IPS-1[1,2,3]）是连接胞浆 dsRNA 受体 RIG-I 与下游信号转导通路的一个接头蛋白，研究结果表明 VISA 无论在 TLR3 非依赖的或者 TLR3 介导的抗病毒IFN 信号途径中都具有关键作用，但目前对 VISA 信号转导的详细机制还不十分清楚。更多 VISA 相互作用蛋白的发现以及它们之间的作用机制的研究能完善我们对 VISA 参与的信号转导机制的认识。本实验利用酵母双杂交系统，用 VISA 蛋白的全长做诱饵（ Bait )筛选 293 T 细胞 cDNA 表达文库，并结合免疫共沉淀实验，双荧光素酶报告基因系统验证筛选到的阳性克隆和 VISA 作用的真实性。通过酵母双杂交系统成功筛选到 Sec13L1 候选基因并验证了其与 VISA 的全长蛋白相互作用，在 293 T 细胞中过表达这个基因,研究结果显示 Sec13L1 过表达能促进 VISA 对 IFNβ 的诱导，并存在剂量效应。