肠出血型大肠埃希菌O157 :H7 espF 基因缺失株和回补株的构建

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

华颖 孙琦 王湘雨 杜艳丽 邵娜 张其威 赵卫 万成松

摘要： 目的 利用Red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的espF基因及其核苷酸片段；建立以pBAD 33质粒为载体的espF基因回补实验平台。方法 设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段，将抗性打靶片段电转入含有PKD46质粒的EDL933w，在PKD 46介导的重组系统帮助下，打靶片段和菌体espF基因发生同源重组，PCR和测序验证；PCR扩增espF及其核苷酸片段的整个ORF区序列，将其克隆入pBAD33质粒，分别将重组质粒转入相应的缺失株，以构建出相应的回补突变株。采用RT-PCR的方法验证在相应的回补突变株中espF及其核苷酸片段是否转录。结果 构建了espF基因及其核苷酸片段缺失的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株和相应的回补株，且espF基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论 本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 espF基因缺失株，并建立以pBAD33质粒为载体的EHEC O157:H7基因回补方法，为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中espF基因的调控机制奠定了基础。

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