松叶猪毛菜瞬时转化体系的建立及初步验证

摘要: 松叶猪毛菜（Salsola laricifolia）是典型的荒漠C3-C4中间型植物，隶属于藜科（Chenopodiaceae）猪毛菜属，是研究C4途径进化以及光呼吸减少机制的最佳物种。以松叶猪毛菜无菌苗为试验材料，通过农杆菌介导的瞬时转化方法，分别对质粒载体、苗龄、农杆菌侵染浓度、侵染时间和乙酰丁香酮浓度进行研究，探究各因素对松叶猪毛菜植株瞬时遗传转化效率的影响，以确立最佳的瞬时转化体系；并在上述体系的基础上，过表达松叶猪毛菜叶绿体型NADP-苹果酸酶基因（SaNADP-ME1），通过GUS组织化学染色和荧光定量PCR验证瞬时转化效果。结果表明：（1）采用pCAMBIA1301构建表达载体，以30 d苗龄植株作为转化受体，在侵染液中添加200 μmol·L-1乙酰丁香酮，农杆菌菌液OD600为0.8，侵染6 h条件下，瞬时转化效率最佳（92%）；（2）构建过表达载体并瞬时转化松叶猪毛菜植株，通过染色检测到GUS活性，并且荧光定量PCR检测到SaNADP-ME1的表达量相比对照组显著增高，该基因成功瞬时过表达转化至植株中。综上所述，本试验在松叶猪毛菜植株中建立了一种快速基因功能验证方法，为以后研究松叶猪毛菜功能基因奠定了基础。