巴斯德毕赤酵母甘油转运体的发现及功能研究

摘要: 摘 要：【目的】分离确认巴斯德毕赤酵母中甘油转运体并初步研究其功能。 【方法】通过生物信息学方法从NCBI数据库中查找可能的甘油转运体(gt1, GeneID: 8197545)，并通过DAS软件对其跨膜结构域进行预测。通过PCR方法扩增该基因并将其与EGFP融合克隆到pPICZ B以及pRS424载体进行亚细胞定位；同时将其与pRS424载体连接后电转到粟酒裂殖酵母中进行异源表达确定其功能；通过同源重组敲除gt1基因并在不同培养基中培养测定aox1基因表达量。【结果】生物信息学显示与酿酒酵母中已经证明的甘油转运体(sugar transporter 1,stl1)类似，GT1蛋白同样为具有疏水结构域的跨膜蛋白，同时亚细胞定位结果显示GT1蛋白定位于细胞膜上，包含有gt1基因的粟酒裂殖酵母可以在以甘油作为唯一碳源的培养基中生长而野生型不可以；在Δgt1突变体中aox1基因可以获得组成型表达。【结论】分离并确认了巴斯德毕赤酵母中的甘油转运体GT1，并初步证明其与aox1基因甘油阻遏相关。