利用CpG DNA甲基化酶M.Sss I共表达载体制备限制性内切酶Not I

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

王佩 陈凯 高嵩

摘要： 限制性核酸内切酶是DNA重组的重要分子生物学工具。由于其本身对DNA有切割作用导致其重组表达在技术上十分困难，产率低、提纯程序复杂。而商业化生产所采用的利用专一型甲基化酶保护宿主DNA的限制酶表达技术流程繁琐、实用性有限。本研究为表达Not I限制酶，采用来源于Spiroplasma sp. MQ1的DNA甲基化酶M.Sss I特异性甲基化CpG序列，甲基化后的DNA会免受识别位点中包含CpG序列的限制酶Not I的切割。将甲基化酶M.Sss I导入大肠杆菌表达宿主ER2566中后，M.Sss I基因在宿主中持续表达并甲基化宿主DNA成CpG甲基化样式；利用此表达体系制备限制性内切酶Not I获得成功。并借助引入纯化标签经过简便的Ni亲和层析和阴离子交换层析2步层析洗脱纯化，制备了高活力高纯度的重组限制酶Not I。此表达体系可应用于一系列识别位点中包含CpG序列的限制酶的表达。

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