抗CD20抗体高产细胞株的筛选及质量评估

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-23 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

纪海姣 李文蕾 黄瑞晶 李剑 徐寒梅

摘要： 目的：筛选高表达单克隆细胞株，并通过优化培养基及流加物，最终达到提高目的蛋白产量及质量的目的。方法：通过有限稀释法对转染目的蛋白的CHO-S细胞进行单克隆化，应用双抗夹心ELISA方法对单克隆细胞株抗体表达量进行初步评估，最后根据筛选细胞株的活率、密度、产量及代谢情况，选择2-3株单克隆细胞进行培养条件优化，并对获得的发酵液进行纯化捕获，根据抗体蛋白表达量、糖型、等电点、纯度、酸碱峰分布等进行相应的评估分析，筛选出最优细胞株及最优培养方案。结果：经过单克隆化处理以及培养条件优化，蛋白的表达量由初始的不到500mg/L提升到2290mg/L ，且抗体蛋白纯度高达97.48%。抗体蛋白质量分析结果显示B1方案为本次实验最优培养方案。结论：通过细胞株筛选、培养基优化能显著提高抗体蛋白的产量及质量，同时对抗体蛋白糖型、等电点、纯度等均有一定程度的优化。因此工业生产中我们完全可以通过高表达克隆的筛选、培养工艺优化等对目的蛋白产量及质量进行一定程度的改善与提高，本次研究对后期实验研究及工业化方案开发都具有很好的指导意义。

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