重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-11-08 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

黄燕 孙益荣 吴敬 宿玲恰

摘要： 在采用前期已构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现，在高诱导强度发酵时，菌体浓度下降明显。同时，通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性，考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9.8 U·mg-1（NPB水解比活力为1047.6 U·mg-1），在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上，本研究又尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略，以进一步提高重组酶在3-L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为：OD600为75时，恒速流加0.8 g·L ·h-1的乳糖溶液，发酵24 h后，酶活达到最大值4788.0 U·mL-1，约为摇瓶发酵酶活的28倍，与OD600为50时、流加0.2 g·L-1·h-1进行诱导的发酵策略（酶活2233.0 U·mL-1）相比，提高幅度约为114.0%，发酵时间缩短40.0%。

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