毕赤酵母Kex2蛋白酶的同源表达及酶学性质

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

王彤 徐岩 喻晓蔚

摘要： Kex2蛋白酶是一种来源于酵母的前体加工蛋白酶。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)同源表达来源于毕赤酵母的Kex2蛋白酶(PPKex2)，研究其表达特性和酶学性质，同时与毕赤酵母表达的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Kex2蛋白酶(SCKex2)进行比较。首先，分别从毕赤酵母和酿酒酵母基因组中获得Kex2基因，将其插入到表达载体pPIC9K中，并转化毕赤酵母菌株GS115。重组菌株经甲醇诱导表达后，结果表明PPKex2的发酵上清液比活是SCKex2的7倍。Kex2蛋白酶经Q-FF强阴离子交换柱纯化后进行酶学性质研究。酶学性质研究结果表明，PPKex2的最适反应pH是8.0-9.0，最适反应温度是37 ℃，与SCKex2性质相近。在稳定性方面，PPKex2在pH 7.0时最稳定，在碱性条件下的稳定性高于SCKex2，在酸性条件下的稳定性低于SCKex2，另外PPKex2的温度稳定性略低于SCKex2。酶促反应动力学研究表明，PPKex2的kcat和kcat/Km值分别为SCKex2的4.8和3.3倍。本文首次报道了同源表达毕赤酵母Kex2蛋白酶的表达特性及酶学性质，为其今后的研究及应用奠定了基础。

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