分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 研究三七总皂苷（PNS）对K562细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法 采用MTT法检测PNS对K562细胞增殖的影响；AO/EB双荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况；流式细胞术检测K562细胞的周期变化；RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化；Western blot 检测cleaved caspase-3蛋白、cyclinD1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果 100~800 μg/mL的PNS 作用于K562细胞后能够抑制细胞增殖。PNS能够上调cleaved caspase-3蛋白表达，促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclin D1蛋白表达，促使K562细胞阻滞在G0/G1期。同时，PNS能够抑制K562细胞mTOR mRNA 表达，降低mTOR蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）的表达，从而抑制mTOR信号通路活性。结论 PNS 对体外培养K562细胞有抑制增殖，促进凋亡，使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleaved caspase-3蛋白表达及抑制cyclin D1蛋白表达有关。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨模拟微重力对K562细胞红系分化的影响及可能作用机制。方法 利用第4代旋转细胞培养系统模拟微重力，联苯胺染色法检测细胞红系分化率；qRT-PCR分析GATA-1、GATA-2、Ets-1、F-actin、β-Tubulin、Vimentin基因表达水平；免疫荧光标记显示微丝、微管、中间纤维的荧光强度，Western blotting检测F-actin、β-Tubulin、Vimentin蛋白表达水平。结果 联苯胺染色结果表明模拟微重力抑制K562细胞红系分化；qRT-PCR结果表明氯高铁血红素（Hemin）处理K562细胞后，调控红系分化的转录因子GATA-1表达上调，GATA-2、Ets-1表达下调；而模拟微重力处理细胞后GATA-1表达下调，GATA-2、Ets-1表达上调，细胞骨架F-actin、β-Tubulin、Vimentin表达下调；免疫荧光结果显示微丝、微管、中间纤维荧光强度减弱；免疫印迹分析结果显示F-actin、β-Tubulin、Vimentin表达下调。结论 模拟微重力能抑制K562 细胞红系分化，其机制可能为模拟微重力破坏细胞骨架，影响GATA-1、GATA-2、Ets-1的基因表达。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的探讨吲哚美辛对K562细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛作用于K562细胞，MTT法检测其对细胞增殖的影响，克隆形成实验检测吲哚美辛对K562细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR分别检测bcr-abl, β-catenin的mRNA表达变化，Western blot分别检测pBCR/ABL、总BCR/ABL, β-catenin,pGSK-3p,c-myc的蛋白表达变化。结果100,200,400 μmol/L吲哚美辛作用细胞48 h后，以浓度依赖性方式抑制K562细胞的增殖和克隆形成能力。3种浓度的吲哚美辛处理K562细胞后，pBCR/ABL、总BCR/ABL的蛋白表达依次减少，而bcr-abl mRNA水平没有明显变化。β-catenin mRNA和蛋白水平依次减少;pGSK-3β、c-myc的蛋白水平均明显降低。结论吲哚美辛可通过抑制BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的活性，从而抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力。
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