分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 随着基因工程技术的快速发展，通过对不同菌株腈水解酶基因的分析，将其克隆到表达菌株内，可以构建高效并且稳定的基因工程菌。对腈水解酶进行分子改造可以明显提高酶的活性、稳定性、底物耐受性和底物特异性等性能，为腈水解酶的工业化应用提供了可能。综述了腈水解酶的来源、结构、催化机理、克隆表达、固定化及分子改造等方面的研究进展。同时对腈水解酶的研究进行了展望，具有重要的指导意义。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 利用大孔吸附树脂DA-201为载体对海洋脂肪酶固定化，并探寻添加剂对固定化过程的影响。分别以NH4Cl、甘露糖和甘氨酸为添加剂，采用单因素和正交实验相结合的方法优化条件。结果显示，以NH4Cl为添加剂的最优条件：柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 6.0，固定化温度30℃，载体投放量0.5g，NH4Cl浓度为25mmol/L，固定化时间3.0h，酶活力达到115.27U/g；比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高47.42%。以甘露糖为添加剂最有条件：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液pH7.0，固定化温度35℃，载体投放量0.5g，甘露糖浓度10mmol/L，固定化时间4.5h；酶活力达到122.75U/g，比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高6.50%。以甘氨酸为添加剂的最优条件：磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液pH7.0，固定化温度20℃，载体投放量0.5g，甘氨酸浓度为25mmol/L，固定化时间7.5h；酶活力达到141.69U/g，比不含有添加剂的固定化酶固定化效率提高26.12%。采用不同添加剂对大孔吸附树脂DA-201的吸附固定化过程有较大影响，可以极大的提高吸附效率；同时发现缓冲液类型、pH、温度、添加剂浓度和固定化时间等对DA-201树脂吸附脂肪酶有很大影响，对后续吸附固定化工业酶研究有较好的参考价值。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 固定化酶作为一种绿色高效的生物催化剂，其性能远超游离酶。目前酶的固定化技术适用范围仍然较小，酶的研究范围多停留在模型酶阶段，扩大固定化酶的研究范围具有十分重要的意义。金属有机骨架材料（MOFs）作为酶固定化的载体在近些年得到了广泛的探索，但是具有生物功能的酶-MOFs复合材料的许多特性仍有待挖掘。本文采用仿生矿化的合成方法将5-羟甲基糠醛氧化酶（HMFO）固定到以沸石咪唑酯（ZIF-8）为代表的MOFs材料中，制备得到一种新的生物催化剂HMFO@ZIF-8，扫描电子显微镜表征其形态区别于经典的菱形十二面体。采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，计算得到酶的固定化效率达到89.0%。HMFO@ZIF-8催化5-羟甲基糠醛的转化率达到84.3%，收率和选择性均高于游离酶。本文拓展了MOFs固定化酶的研究范围，为研究其他生物大分子复合材料的生物催化剂提供一定的借鉴意义。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 以海藻酸钠、羧甲基纤维素钠（CMC）为载体，分别以乙二醇缩水甘油醚（EGDE）和戊二醛为交联剂，采用包埋交联法对脂肪酶进行固定化，结果显示EGDE的交联效果要优于戊二醛，添加EGDE的固定化酶酶活最好。得到制备固定化酶的最优方案为海藻酸钠2.5%，CMC 浓度1.5%，给酶量800 U/mL复配载体，氯化钙5%，以0.02%的EGDE交联固定30 min，由此制备得到酶活约为380 U/g的固定化酶。固定化酶的最适反应pH为8.5，比游离酶增大0.5个单位；最适反应温度是45℃，比游离酶提高5℃；耐热性能变好，且重复使用7次后仍能保持60%左右的相对酶酶活。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 以海藻酸钠、羧甲基纤维素钠（CMC）为载体，分别以乙二醇缩水甘油醚（EGDE）和戊二醛为交联剂，采用包埋交联法对脂肪酶进行固定化，结果显示EGDE的交联效果要优于戊二醛，添加EGDE的固定化酶酶活最好。得到制备固定化酶的最优方案为海藻酸钠2.5%，CMC 浓度1.5%，给酶量800 U/mL复配载体，氯化钙5%，以0.02%的EGDE交联固定30 min，由此制备得到酶活约为380 U/g的固定化酶。固定化酶的最适反应pH为8.5，比游离酶增大0.5个单位；最适反应温度是45℃，比游离酶提高5℃；耐热性能变好，且重复使用7次后仍能保持60%左右的相对酶酶活。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-04-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 将来源于Clostridium cellulolyticum H10的DPEase基因在食品级表达系统Bacillus subtilis中进行产酶研究，在3-L发酵罐中高密度发酵最终酶活可达495 U/mL，得到高表达量的DPEase酶液。通过硅藻土-海藻酸钠（吸附包埋法）对重组细胞进行固定化研究，结果表明，当海藻酸钠浓度2％，细胞包埋量50 g/L，CaCl2浓度2％，硅藻土浓度1％时，固定化细胞酶活回收率可达64％，固定化细胞与游离细胞相比最适pH不变，最适温度提高5℃，热稳定性明显提高，连续反应7个批次后转化率仍然为28％，仍保持81％的残余酶活，具有很高的工业应用价值。
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