人RhoA发生了SUMO化修饰

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》

万滢聪 李春燕 佘佳瑶 王靖雅 陈明

摘要： 目的:探讨人RhoA是否发生SUMO化修饰。方法运用重叠延伸PCR和双酶切连接方法构建pcDNA3-3flag-RhoA真核表达载体，测序验证。将重组RhoA质粒转染进HEK293T细胞中，免疫印迹检测质粒的表达。将重组RhoA质粒分别和SUMO各型质粒共转染进HEK293T细胞中，细胞免疫荧光检测RhoA与SUMO之间是否存在共定位。免疫共沉淀方法检测RhoA是否发生SUMO化修饰。结果成功构建pcDNA3-3flag-RhoA重组质粒，测序结果提示存在一个同义突变，其余完全正确；免疫印迹检测重组RhoA质粒能高效表达融合蛋白；免疫细胞化学检测到RhoA与SUMO2/3存在共定位，RhoA与SUMO1不存在共定位；免疫共沉淀检测SUMO2/3对RhoA发生修饰作用，SUMO1对RhoA未发生修饰作用。结论人RhoA发生了SUMO2/3参与的SUMO化修饰，可能参与神经系统损伤后轴突再生的调控。

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