SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

许晓玲 柳英 陈青阁 黄通亮 高基民

摘要： 目的 制备链亲和素连接的人干扰素诱导T细胞α趋化因子融合蛋白（SA/hI-TAC），并对其生物学功能进行鉴定。方法 构建pET24a-SA-hI-TAC/pET21a-hI-TAC- SA表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达两种融合蛋白，用镍金属螯合层析纯化、透析复性及蛋白质印迹法（Western blot）鉴定，融合蛋白中I-TAC部分的生物学活性由淋巴细胞趋化实验检测；融合蛋白中SA的生物学活性由流式细胞仪测定。结果 两种融合蛋白可在大肠杆菌BL21中被诱导表达，分别占细菌表达总蛋白量的12%和25%，经镍柱纯化后融合蛋白纯度达85%、90%，经丙烯葡聚糖凝胶S-100过滤层析后，纯度均可达到98%，融合蛋白在生物素化的MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞）表面的修饰效率分别为91.3%、98.8%，并对淋巴细胞的趋化作用呈剂量依赖性，且hI-TAC-SA的趋化作用明显强于SA-hI-TAC。结论 SA/hI-TAC 双功能融合蛋白可能应用于肿瘤局部治疗以及肿瘤疫苗。

通过

 点击量 1669  下载量 740  评论 0