分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-11-08 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在通过异源表达获得地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CP-16的脂类水解酶，并探究其在羽毛降解过程中的作用。试验以地衣芽孢杆菌CP-16基因组DNA为模板，扩增脂类水解酶基因，转化入大肠杆菌中表达，获得重组酶L-4。研究重组酶L-4的适宜pH、pH稳定性、适宜温度、温度稳定性以及有机溶剂和金属离子对其相对活性的影响，同时探究其对角蛋白酶K水解天然羽毛角蛋白的作用。结果显示，获得的脂类水解酶基因大小为747 bp，编码248个氨基酸，在大肠杆菌中成功表达出重组酶L-4，其分子质量约为28.3 ku，酯酶活性为0.42 U/mL，适宜pH为6.5，适宜温度为50 ℃；在pH 6.5~9.5条件下处理30 min相对活性保持80%以上，在低于50 ℃温度条件下处理30 min相对活性保持70%以上。二价铁离子（Fe2+）、钠离子（Na+）、锰离子（Mn2+）、钙离子（Ca2+）对重组酶L-4相对活性具有激发作用，钡离子（Ba2+）、锌离子（Zn2+）、铜离子（Cu2+）、镍离子（Ni2+）对重组酶L-4相对活性具有抑制作用。当有机溶剂浓度为30%时，重组酶L-4在二甲基亚砜（DMSO）和甲醇中保持97%和85%的相对活性，在丙酮、乙醇中保存45%以上的相对活性，在异丙醇中保存不到20%的相对活性，而在乙腈中相对活性基本完全丧失。用重组酶L-4预处理天然羽毛底物，可提高角蛋白酶K对底物的水解效率，促进率为4.32%。由此可见，脂类水解酶可降解羽毛表层脂质，可在促进角蛋白酶水解羽毛角蛋白中发挥作用。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-25 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究高产纤维分解酶康氏木霉诱变选育与发酵条件优化。通过对康氏木霉诱变选育（紫外、硫酸二乙酯、紫外-硫酸二乙酯复合诱变），获得产纤维分解酶高的突变菌，并对其产酶发酵条件和水解秸秆能力进行研究。结果表明：康氏木霉原菌经紫外、硫酸二乙酯、紫外-硫酸二乙酯复合诱变筛选出了1株突变菌康氏木霉UH-1；与原菌相比，突变菌木聚糖酶活性提高了42.7%，纤维素酶活性提高了78.5%。康氏木霉UH-1最适固态发酵产酶条件为玉米秸秆：麸皮为7：3、硫酸铵浓度2%、接种量1.1 mL、培养基含水量67%、发酵时间84 h、磷酸二氢钾浓度1%。在此条件下滤纸酶活性达到0.86 U/g，纤维素酶活性达到99.81 U/g，木聚糖酶活性达到1 150.32 U/g；而康氏木霉原菌滤纸酶活性为0.23 U/g，纤维素酶活性为46.38 U/g，木聚糖酶活性为677.86 U/g。本研究表明，紫外-硫酸二乙酯复合诱变可有效对康氏木霉进行诱变育种，改善其产酶能力和秸秆水解能力。
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