“通督调神”电针预处理介导miR-124-3p/GSK-3β/Cyp-D信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质线粒体通透性转换孔的影响及机制探讨

摘要: 背景  缺血性脑卒中发病率、死亡率、致残率均较高，溶栓后的再灌注损伤对患者影响较大，针刺是治疗本病的特色疗法，但作用机制尚不明确。目的  探讨“通督调神”电针预处理对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠miR-124-3p/糖原合成酶激酶β（GSK-3β）/亲环素D（Cyp-D）信号通路及线粒体膜通透性转换孔（MPTP）的影响，探讨其防治CIRI的可能机制。方法  2022年6—8月，将100只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组和电针+激动剂组，每组20只。造模前干预7d，电针组、电针+激动剂组选取通督调神穴组：百会、风府、大椎穴进行电针干预，1次/d，连续7d；造模前24h电针+激动剂组和抑制剂组分别侧脑室注射miR-124激动剂和抑制剂（5nmol）。除假手术组，余组采用改良线栓法制备大鼠右侧脑缺血再灌注模型；造模成功后，取大鼠右侧脑皮质，采用改良神经功能损伤评分量表（mNSS）、TTC染色观察各组大鼠神经功能损伤程度，TUNEL染色以及透射电镜观察神经细胞损伤情况；免疫荧光染色、Westernblotting、实时荧光定量PCR检测各组大鼠脑皮质GSK-3β、p-GSK-3β、Cyp-D、细胞色素C（Cyt-C）、Caspase-3表达。结果  除假手术组，各组大鼠均造模成功。与假手术组比较，模型组大鼠mNSS评分及脑组织相对梗死体积均增加，线粒体结构破坏严重，细胞凋亡指数升高，p-GSK-3β、Cyp-D阳性表达分别减弱和增强，miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3mRNA表达增高，p-GSK-3β/GSK-3β值降低，Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3蛋白相对表达量增高，MPTP开放程度增加（P<0.05）。与模型组比较，电针组、抑制剂组mNSS评分及相对梗死体积均降低，线粒体结构破坏减轻，p-GSK-3β/GSK-3β增加，Caspase-3蛋白相对表达量降低；电针+激动剂组GSK-3βmRNA表达增高（P<0.05）；电针组、抑制剂组、电针+激动剂组细胞凋亡指数降低，p-GSK-3β、Cyp-D阳性表达分别减弱和增强，miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3mRNA表达降低，Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量降低，MPTP开放程度降低（P<0.05）。与电针组比较，抑制剂组p-GSK-3β阳性表达增强，Cyp-D阳性表达减弱，miR-124-3p及Cyp-D、Cyt-C、Caspase-3mRNA表达降低，GSK-3βmRNA表达增高，Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量降低，MPTP开放程度降低（P<0.05）；电针+激动剂组细胞凋亡指数增高，p-GSK-3β阳性表达减弱，Cyp-D阳性表达增强，miR-124-3p、Cyt-C、Caspase-3mRNA表达增高，Cyp-D、Cyt-C蛋白相对表达量增高，MPTP开放程度增加（P<0.05）。结论  “通督调神”电针预处理可减轻CIRI大鼠神经损伤，其机制可能与介导miR-124-3p/GSK-3β/Cyp-D信号通路、抑制线粒体MPTP开放进而减轻细胞损伤相关。这一研究结果从机制上进一步验证了“通督调神”针法治疗CIRI的疗效，同时为中医“治未病”提供新的科学依据，促进临床应用。