分类： 生物学 >> 植物学 提交时间： 2023-05-30 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 从植物组织中释放出高质量的原生质体是建立其他技术体系如蛋白亚细胞定位、瞬时表达分析、蛋白质间互作的前提。为了快速挖掘C3-C4中间型植物松叶猪毛菜（Salsola laricifolia）的特殊功能基因，建立一个简单高效的叶片原生体的制备方法必不可少。本研究以松叶猪毛菜无菌组培苗的真叶为材料，分析不同纤维素酶和离析酶的浓度配比、渗透压对原生质体分离的影响。结果表明：采用25 d龄的无菌组培苗真叶，在2%纤维素酶+0.5%离析酶+0.6 molL-1甘露醇的酶解液中25 ℃酶解2 h，使用W5溶液在800 rpmmin-1的转速下纯化，原生质体产量可达1.21106 个，活力为85%。并且利用得到的松叶猪毛菜原生质体作为受体，用PEG 转化法成功转化pBI121-SaNADP-ME4-GFP 质粒载体，检测到SaNADP-ME4定位于叶绿体中。本项研究建立了松叶猪毛菜叶片原生质体高效制备体系，为松叶猪毛菜特殊基因功能的挖掘奠定了基础。
分类： 地球科学 >> 地理学 提交时间： 2020-12-17 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 松叶猪毛菜（Salsola laricifolia）是典型的荒漠C3-C4中间型植物，隶属于藜科（Chenopodiaceae）猪毛菜属，是研究C4途径进化以及光呼吸减少机制的最佳物种。以松叶猪毛菜无菌苗为试验材料，通过农杆菌介导的瞬时转化方法，分别对质粒载体、苗龄、农杆菌侵染浓度、侵染时间和乙酰丁香酮浓度进行研究，探究各因素对松叶猪毛菜植株瞬时遗传转化效率的影响，以确立最佳的瞬时转化体系；并在上述体系的基础上，过表达松叶猪毛菜叶绿体型NADP-苹果酸酶基因（SaNADP-ME1），通过GUS组织化学染色和荧光定量PCR验证瞬时转化效果。结果表明：（1）采用pCAMBIA1301构建表达载体，以30 d苗龄植株作为转化受体，在侵染液中添加200 μmol·L-1乙酰丁香酮，农杆菌菌液OD600为0.8，侵染6 h条件下，瞬时转化效率最佳（92%）；（2）构建过表达载体并瞬时转化松叶猪毛菜植株，通过染色检测到GUS活性，并且荧光定量PCR检测到SaNADP-ME1的表达量相比对照组显著增高，该基因成功瞬时过表达转化至植株中。综上所述，本试验在松叶猪毛菜植株中建立了一种快速基因功能验证方法，为以后研究松叶猪毛菜功能基因奠定了基础。
分类： 环境科学技术及资源科学技术 >> 环境科学技术基础学科 提交时间： 2020-07-16 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 以藜科猪毛菜属具有代表性的C3荒漠半灌木植物天山猪毛菜（Salsola junatovii Botsch.）为研究对象，采用盆栽控水试验设置正常水分与轻度、中度和重度3种胁迫处理，测定不同程度干旱胁迫下叶片含水量、4种C4光合酶[磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)、NADP-苹果酸酶（NADP-ME）、NAD-苹果酸酶（NAD-ME）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)]的活性以及蛋白表达量、稳定碳同位素比值（δ13C值）；同时测定6个野外不同年平均降水量地区叶片的δ13C值，明确不同干旱胁迫对天山猪毛菜C4光合酶和δ13C值的影响；探讨天山猪毛菜是否会通过增强C4途径的表达来适应干旱胁迫。结果显示：（1）植物叶片含水量随干旱胁迫的加剧而降低；（2）4种光合酶，仅有PEPC和NAD-ME受到干旱胁迫的影响。这两种酶的活性和蛋白表达量变化趋势基本一致，它们均随着干旱胁迫程度的加剧先增加，并在中度干旱胁迫达到最大值，然后在重度干旱胁迫下急剧下降。NADP-ME活性、PEPCK活性及其蛋白表达量均不受干旱胁迫的影响；（3）尽管在轻度和中度干旱胁迫下天山猪毛菜叶片δ13C值升高，并在中度干旱胁迫下δ13C值最高，但在胁迫处理下δ13C值仍处于C3植物范围内；野外样品叶片的δ13C值表明，年降水量相对较少的3个地区样品δ13C值高。
分类： 生物学 >> 植物学 提交时间： 2020-01-02 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 猪毛菜属（Salsola L.）是藜科中最大的属之一，在新疆植物区系和植物资源开发利用中占有重要地位。通过对新疆猪毛菜属32种植物的果时花被片附属物和叶片解剖结构的特征及其地理分布的分析，结果表明：① 果期花被片的附属物可分为两类，其中具翅状附属物的形态更加丰富；② 得到4种叶片解剖结构类型，包括C3-SYMP型、C3-C4中间型、C4-SALS+H型和C4-SALS-H型。依据叶片解剖结构类型判断，新疆猪毛菜属中C4植物占到绝大多数；③ 在新疆分布的猪毛菜属种类以草本植物居多，其生境主要以旱生和盐生环境为主；④ 猪毛菜属植物分布在新疆的6个地理分布地区，其中以准噶尔亚地区分布最多，塔城伊犁亚地区分布次之；⑤ 新疆猪毛菜属植物与国外邻近地区的共有种明显多于国内邻近地区。
分类： 地球科学 >> 地球科学其他学科 提交时间： 2019-09-11 合作期刊: 《干旱区研究》
摘要： 由于新疆野苹果[WTBX](Malus sieversii[WTBZ])果实富含多糖、多酚、可溶性果胶及其他次生代谢物质，导致果实的总RNA提取相对比较困难，质量较差。因此，本试验以不同发育时期的新疆野苹果的果实为材料，采用TaKaRa试剂盒、全氏金试剂盒、田伟等改良的CTAB法、本试验改良的CTAB法(一)和CTAB法(二)这5种方法来摸索提取野苹果果实的总RNA的有效方法。结果表明：2种试剂盒均无法从野苹果果实中提取出RNA；通过3种改良CTAB法提取的RNA，在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带，并且纯度均较高， OD260/OD280值在1.8~2.2之间、OD260/OD230值大于2.0。但是只有本试验改良CTAB法(一)获得较高的RNA产量，从5个不同发育时期的野苹果果实中提取的RNA平均值在116.79~474.76 μg·g-1。改良CTAB法(一)通过延长LiCl沉淀时间，将-20 ℃放置15 min改为4 ℃放置过夜(时间不超过16 h)，可以有效地除去RNA中的杂质污染，使得RNA充分沉淀。这种改良方法耗时相对较长，需要2 d，但是方法易于操作且提取成本较低。因此，改良CTAB法(一)是适用于提取野苹果果实(尤其是发育晚期)总RNA的有效方法，完全可以满足后期的分子生物学试验所需。
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