Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》

邱嘉文 何肖龙 张宝 杜蕾 曾庆 李森 熊欢欢 龙敏 罗军 曹虹

摘要： 目的 建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的 CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白 Muc2在鼠李糖乳杆菌 GG株（LGG）抑制大肠杆菌 K1（Escherichia coli, E.coli k1）株 E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法 设计 2个长 20~25 bp的sgRNA分别靶向Muc2，合成sgRNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体，转染野生型人结肠癌Ht29细胞，蛋白免疫印迹法检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后，竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠上皮中的作用。结果 目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确；稳定抑制Muc2表达的细胞株筛选成功；Muc2基因沉默后，与空白对照组相比，其表达水平明显降低，抑制率可达81%（P<0.01）；黏附侵袭实验中E44相对黏附率为 72.23%（P<0.01），相对侵袭率为 81.49%（P<0.01），益生菌 LGG的抑制 E44黏附和侵袭作用明显下调。结论Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力，提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘 膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一，并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。

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