位点特异整合微环DNA的体内制备

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

聂永强 马海燕 马晴雯

摘要： 目的：应用诱导表达的LR克隆酶系统，建立一种在细菌体内获得基于链霉菌噬菌体ФC31整合酶系统的位点特异整合型微环DNA的方法，为实现无细菌骨架等冗余序列的转基因奠定基础。方法：构建包含阿拉伯糖启动子的LR克隆酶系统和ФC31整合酶系统的亲本质粒，在L-阿拉伯糖的诱导下重组产生表达ФC31整合酶的微质粒和包含有目的基因和attB位点等元件的微环DNA。以限制性内切酶酶切电泳定性其重组效率，qPCR定量分析微环、微质粒以及亲本质粒的比例，定量计算重组效率。观察随着诱导时间的推进微环/微质粒比例的变化。结果：细菌体内LR克隆酶系统可有效催化亲本质粒的重组，重组率达85%以上。相比商品化LR克隆酶体外反应具有更高的稳定性而且更经济。结论：获得了一种高效、稳定的细菌体内产生位点特异性整合型微环DNA的亲本质粒。

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