分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的 克隆人CD45 cDNA并导入Hela细胞中表达,建立研究CD45功能的细胞模型。方法 采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增CD45基因PTPRC的cDNA,将其克隆至pMD-18T载体。构建重组真核表达载体PcDNA3.1-3xflag-CD45,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切及测序验证。将其转染至Hela细胞,以流式细胞术(FCM)和免疫印迹(WB)分析CD45在Hela细胞中的表达情况,碱性磷酸酶试剂盒检测CD45的活性。结果 分离到长约3900 bp的人PTPRC cDNA片段,将其插入pMD-18T载体获得了cDNA克隆。酶切和测序结果证实重组表达载体PcDNA3.1-3xflag-CD45构建成功,FCM和WB分析表明CD45能在Hela细胞中有效表达,且表达的重组CD45蛋白具有生物学活性。结论 成功获得人PTPRC cDNA克隆并在Hela细胞中有效表达,为进一步研究CD45功能奠定了基础。