病毒核酸提取前的高温灭活过程显著降低可检出病毒核酸模板量

分类： 生物学 >> 分子生物学 提交时间： 2020-02-20

张沁欣 赵庆顺

摘要： 新冠病毒是病毒感染性肺炎（COVID-19）的病原体。然而，新冠病毒核酸临床检出的假阴性率很高。假阴性意味着漏检，不仅会导致疑似患者不能快速确诊，而且会使漏检者成为潜在的病毒传染源。因此，提高新冠病毒核酸检出率十分迫切。目前国家卫健委相关指南要求在提取样本核酸前需将样本置于56℃以上以灭活病毒。这一灭活过程无疑是保护临检人员免受病毒暴露所必需，但也会破坏病毒核酸的完整性，导致部分样品不能被正常检出，成为高假阴性率的原因之一。最近，我们以猪PDEV冠状病毒（疫苗）作为模型研究了高温灭活过程对病毒核酸完整性的影响。结果表明：保存在常用等渗盐溶液Hank’s液中的样品经56℃孵育30分钟后可检出冠状病毒核酸损坏了一半，而以92℃孵育5分钟，则可检出的冠状病毒核酸损失了96%以上。当采用一款市售的R503样品保存液保存PEDV时，经56℃孵育30分钟后病毒核酸可检出量是Hank’s液的3倍，若是92℃孵育5分钟，则可检出量是Hank’s液的42倍。这些结果提示，使用可有效保护样本RNA特别是避免样本RNA在高温灭活时受损的样品保存液，不但可以让临检人员依然能够在高温灭活后使用样品，还有望提高阳性检出率。

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