基于ISSR 分子标记的叶子花亲缘关系分析和指纹图谱构建

分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-03-06 合作期刊: 《广西植物》

孙利娜 李进华 甘四明 唐庆 李冰 刘雁玲 马坚炜 廖美兰 黄欣 林茂

摘要： 该研究从DNA 模板浓度、引物浓度、退火温度和循环次数等方面优化了叶子花ISSR-PCR 反应体系和反应程序，利用11 个ISSR 引物对131 个叶子花品种进行PCR 扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，分析品种遗传多样性和遗传距离，并构建品种聚类图和指纹图谱。结果表明，优化的ISSR-PCR 反应体系中DNA 模板浓度为0.5 ng·μL-1，引物浓度为0.5 μM·L-1，引物UBC813、UBC814、UBC815、UBC823、UBC824、UBC835、UBC840、UBC841、UBC843、UBC844 和UBC876 的最佳退火温度分别为52.3、55.9、54.3、54.3、53.6、56.2、56.2、51.9、54.4、54、50 ℃，循环次数为32。用11 个ISSR 引物对131 个叶子花品种扩增出161 条带，其中多态性条带156 条，多态性比率为96.89%。单个引物的等位基因数、有效等位基因数、Nei’s 基因多样性指数和Shannon’s信息指数分别为1.86~2.00、1.33~1.68、0.21~0.39 和0.34~0.57，平均值分别为1.969、1.478、0.294 和0.447。引物UBC841 的鉴别率最高(80.92%)，可有效鉴别106 个品种，再与引物UBC876 结合可将131 个叶子花品种完全鉴别开，建立了各品种的指纹图谱。叶子花品种的遗传距离范围为0.00~0.60，平均值0.365，遗传多样性较低，在遗传距离0.58 处，131 个品种分为6 大类群，聚类分析表明同一个种的品种大多数聚在一类，但同一个种仍有品种未聚在一类或亚类、也有多个种的品种聚在一类。该研究较为准确的揭示了叶子花种质资源的遗传多样性，建立的指纹图谱为叶子花品种登记、知识产权保护以及品种鉴定提供了可靠技术和有效手段。

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