sPD-1过表达增强衰老肿瘤细胞疫苗抗小鼠乳腺癌作用

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》

陈泽宏 林惠文 胡康 苏如雄 赖楠 杨子科 康世均

摘要： 目的:探讨可溶性PD-1（sPD-1）过表达后对衰老肿瘤细胞疫苗（STCV）抗小鼠乳腺癌的增强作用。方法干扰素γ（IFN-γ）刺激小鼠乳腺癌细胞4T1，流式细胞术检测PD-L1表达；sPD-1过表达慢病毒感染4T1，显微镜观察增强绿色荧光蛋白表达情况;CCK8实验比较4T1、4T1/sPD-1增殖活力；qRT-PCR、Western blot 从mRNA、蛋白质水平验证sPD-1表达；干扰素γ预处理4T1细胞，添加4T1/sPD-1培养上清，孵育后流式细胞术检测PD-1阳性细胞比例；X射线照射联合Veliparib处理4T1、4T1/sPD-1细胞，衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色，观察蓝染细胞比例；Balb/c小鼠右后腿皮下种植4T1，左后腿注射PBS、4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV，观察各组小鼠成瘤率。结果IFN-γ能导致4T1细胞PD-L1上调（P0.05）；4T1/sPD-1细胞在mRNA和蛋白质上均可检测到sPD-1表达产物，4T1细胞则均未能检测到；干扰素γ预处理的4T1细胞，PD-1阳性比例（6.893±0.271）%，添加4T1/sPD-1细胞培养液处理后，PD-1阳性细胞比例升高达（55.450±0.555）%（P<0.001）；4T1、4T1/sPD-1在联合处理后，镜下见大量蓝染变形的衰老细胞；小鼠荷瘤实验中，预防肿瘤发生实验，PBS组所有小鼠出现肿瘤生长，4T1 STCV组有28.787%小鼠未发生肿瘤，4T1/sPD-1 STCV组近55.556%小鼠未发现肿瘤发生；治疗肿瘤实验中，观察期内PBS组小鼠均发生肿瘤，4T1 STCV、4T1/sPD-1 STCV组无瘤小鼠比例分别为11.111%和38.89%。结论衰老肿瘤细胞疫苗对小鼠乳腺癌具有防治作用，且sPD-1过表达后能够增强衰老肿瘤细胞疫苗的抗肿瘤作用。

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