猪硒蛋白P基因克隆、鉴定及组织mRNA相对表达量分析

分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》

汤加勇 赵华 何爱华 贾刚 刘光芒 陈小玲 蔡景义 周继昌

摘要： 本试验旨在克隆、鉴定猪硒蛋白P基因（Sepp1），并探明其在猪不同组织中的mRNA相对表达量，为以猪为模型研究硒蛋白P（SelP）的功能奠定基础。根据表达序列标签（EST）序列设计引物，利用cDNA末端快速克隆（3′-RACE）技术从猪肝脏总RNA中扩增出含开放阅读框（ORF）至polyA片段，然后与EST序列进行拼接；采用荧光定量PCR技术考察Sepp1在猪9个组织中的mRNA相对表达量。结果显示：1）扩增出共1 707 bp的片段，测序后与EST拼接获得了2 109 bp的猪Sepp1序列，并提交至NCBI GenBank数据库，序列号为EF113596.2；该基因1 170 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有83.72%和75.64%序列同源性，其编码390个氨基酸，含有14个硒代半胱氨酸（Sec）残基，分别位于第59、267、286、309、311、327、339、352、354、361、376、378、385和387位。2）Sepp1 mRNA在猪组织中广泛分布，在肝脏中具有最高分布，依次为甲状腺>肾脏>睾丸>下丘脑>脾脏>垂体>心脏>肌肉。本试验成功克隆、鉴定了猪Sepp1，检测了其在猪不同组织中表达分布情况，为其进一步以猪为模型探讨其功能奠定了基础。

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