分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-06 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用，在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达，为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法：根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(mIL-33)的氨基酸序列，以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的mIL-33基因片段，通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的mIL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白（EGFP）基因分别构建到双表达单元质粒 pBudCE4.1的不同启动子下;重组质粒经 lipofectamine 3000 和PEI转染293FT 细胞;以 Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的mIL-33刺激巨噬细胞Raw264.7，ELISA检测培养上清的TNFα水平，以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高；Western blot和ELISA 结果显示密码子优化的mIL-33表达水平较未优化序列更高，在EF-1α启动子和CMV启动子指导下mIL-33在293FT 细胞表达水平相当，CD8α信号肽成功引导mIL-33的分泌，产物具生物学活性。结论: 密码子优化操作显著改善了 mIL-33在哺乳动物细胞中的表达水平，为进一步研究奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建呈现人白细胞介素-13（ interleukin-13，IL-13）抗原肽的Qβ噬菌体病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）疫苗。方法：将人 IL-13 抗原肽经基因重组插入Qβ噬菌体衣壳蛋白(CP)基因的C末端。在BL21细菌中，经IPTG诱导CP及C端接有IL-13 抗原肽的CP（CP /IL-13）同时表达。以硫酸铵沉淀及蔗糖密度梯度离心进行VLPs纯化及分析嵌合VLPs的存在，以HPLC分析VLPs纯度，以及以电镜观察颗粒形态。小鼠经皮下免疫VLPs后采集血清，以ELISA检测人 IL-13特异性IgG抗体水平。结果：重组蛋白CP与CP /IL-13获得成功表达，两者在密度梯度离心中有一致的、与QβVLPs相同的沉降行为，而CP /IL-13单独无Qβ颗粒行为。经纯化获得了高纯度颗粒，嵌合颗粒与Qβ颗粒形态相似。此外，该VLPs疫苗诱导小鼠产生了IL-13特异的抗体应答。结论：利用共表达策略可成功构建呈现人 IL-13 抗原表位的嵌合VLPs，为以主动免疫方式调控IL-13在疾病中的病理作用，提供了具有临床应用潜能的疫苗形式。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的: 优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1（human papillomavirus type 16 major capsid protein L1，HPV16L1）在毕赤酵母中的表达，并考察可能的影响因素。方法: 四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16（其中，M16和Y16按酵母密码子优化，P16为哺乳动物细胞密码子优化，而W16为野生型序列）分别克隆于毕赤酵母表达质粒pPinkTM-HC（高基因拷贝菌落筛选）和pPinkTM-LC（低基因拷贝菌落筛选），并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后，取菌体样品经Western Blot分析L1蛋白的表达。结果: M16显示了最高的表达水平，其次是Y16与P16，而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示，四个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析四个序列的mRNA二级结构，Y16为–409.40 kcal/mol和43.85%；M16为–451.50 kcal/mol和47.83%；P 16为–606.50 kcal/mol and 64.10%；W16为–384.70 kcal/mol and 38.01% 。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株，质粒pPinkTM-HC与pPinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论: 密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达，但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应，提示密码子优化仅是部分原因，而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性，显著影响了表达水平。在本研究中，基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。关键词 毕赤酵母；表达；人乳头瘤病毒；主要衣壳蛋白L1
分类： 材料科学 >> 材料科学（综合） 提交时间： 2017-03-31 合作期刊: 《金属学报》
摘要： 为了评价反应堆候选结构材料与液态金属的相容性，本工作针对低活化马氏体钢在液态Pb-Bi共晶中的拉伸脆化现象，采用2种拉伸速率的拉伸实验，研究了中国低活化马氏体钢（CLAM）在200~500 oC范围内的Ar气和液态Pb-Bi共晶环境中的拉伸断裂行为。结果表明，在Ar气环境中拉伸时，CLAM钢均为韧性断裂；而在液态Pb-Bi共晶环境中拉伸时，在300~450 oC温度下会出现脆性断裂现象。在300~450 oC脆化温度区间内试样强度变化不大，但总延伸率显著降低，出现“韧谷”现象。然而拉伸温度在低于或高于脆化温度区间时，脆断现象消失，总延伸率回复到与对比试样相同水平。在更低的拉伸速率下， CLAM钢发生“韧谷”现象的温度区间明显扩大，表明拉伸速率对CLAM钢在液态Pb-Bi共晶中的脆化也有影响。经低温回火硬化后，CLAM钢在液态Pb-Bi共晶中出现拉伸脆化现象是由于液态Pb-Bi接触裂纹尖端后造成表面能降低，进而降低临界解理应力而发生脆性断裂。
分类： 材料科学 >> 材料科学（综合） 提交时间： 2016-11-15 合作期刊: 《金属学报》
摘要： 加速器驱动次临界ADS（Accelerator Driven Subcritical system）系统由加速器、散裂靶、反应堆三部分组成，被认为是安全处理核废料最具前景的技术方案。其中，散裂靶用结构材料需要同时具有耐高温、抗辐照、抗液态金属腐蚀等性能。针对这一挑战研发了新型核用马氏体耐热钢－SIMP钢。通过制衡9-12Cr%马氏体耐热钢中C、Cr、Si等重要元素含量对耐高温、抗辐照、抗液态金属腐蚀性能的影响，获得了SIMP钢优化的化学成分，极好地平衡了SIMP钢耐高温、抗辐照、抗液态金属腐蚀三方面性能。以1吨级和5吨级SIMP钢为实验材料的各项性能测试结果表明，SIMP钢是ADS系统中散裂靶的首选结构材料。
分类： 其他 >> 综合 提交时间： 2016-11-04 合作期刊: 《中国科学院院刊》
摘要： 近年来，随着禽流感、结核病、埃博拉等疫情的不断发生，全球越来越多的医务工作者和科研人员从事危险病原微生物相关的诊断、检测、研究、开发、生产和教学等活动，而这些活动必须在高等级生物安全实验室内进行。文章通过比较国内外高等级生物安全实验室体系发展现状及特点，分析了我国高等级生物安全实验室体系在整体布局、经费投入、管理和支撑体系建设等方面所存在的问题，提出了完善实验室建设布局、加大资金投入、加强管理和支撑体系建设、强化信息和资源共享等建议以推动我国高等级生物安全实验室体系建设，为我国应对新发和突发传染病疫情提供支持。
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