分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨石蒜碱对肾癌细胞ACHN的作用及可能机制。方法 流式细胞仪分析石蒜碱对ACHN细胞周期及凋亡的影响；MTS检测石蒜碱对ACHN细胞增殖的作用；划痕实验、Transwell实验检测石蒜碱对ACHN细胞迁移、侵袭能力的影响；平板克隆形成检测石蒜碱对ACHN细胞集落形成能力的影响；qRT-PCR分析基因转录的变化；Western blotting分析蛋白表达水平的变化。结果 石蒜碱对 ACHN半数抑制浓度为 24.34 μmol/L。石蒜碱能将肾癌 ACHN细胞剂量依赖性阻滞于 G0/G1期（P<0.01）；与正常对照组相比，5 μmol/L石蒜碱即能诱导ACHN细胞凋亡（P<0.01）、抑制ACHN细胞增殖（P<0.01）；处理后ACHN细胞迁移能力（P<0.01）、侵袭能力（P<0.01）显著下降、集落形成能力亦呈剂量依赖性降低。qRT-PCR及 Western blotting显示 5 μmol/L的石蒜碱即能在基因及蛋白水平上调CDK4、Bax表达，而下调CyclinD1、Bcl-2、Survivin的表达；caspase-3基因表达增加，caspase-3蛋白水平变化却不甚明显。结论 石蒜碱对肾癌ACHN细胞具有明显的抗肿瘤效应，该药可为肾癌的治疗提供新思路。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨稳定低表达DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）基因对人膀胱癌细胞生长和凋亡的影响。方法 包装表达DNMT3b siRNA和阴性对照siRNA的慢病毒，通过慢病毒感染的方法获得稳定低表达DNMT3b的膀胱癌细胞BIU-87及对照细胞。MTT和流式细胞仪检测DNMT3b稳定低表达对细胞增殖和凋亡的影响；体内裸鼠成瘤实验观察DNMT3b稳定低表达对肿瘤的抑制效果；荧光定量PCR和Western blot检测DNMT3b稳定低表达对细胞生长和凋亡相关基因表达的影响；甲基化特异性PCR检测对细胞生长和凋亡相关基因甲基化的影响。结果 荧光定量PCR和Western blot检测结果显示，DNMT3b mRNA和蛋白水平在BIU-87稳定细胞株中稳定低表达；DNMT3b稳定低表达可以抑制BIU-87细胞的生长，并且抑制裸鼠皮下瘤体的生长；DNMT3b稳定低表达可以促进BIU-87细胞的凋亡；DNMT3b稳定低表达可以增加凋亡及细胞生长相关基因DAPK，Bax和RASSF1A mRNA和蛋白水平的表达；DNMT3b稳定低表达可以减少凋亡及细胞生长相关基因DAPK，Bax和RASSF1A启动子区域的甲基化水平。结论 DNMT3b稳定低表达可能通过调控凋亡相关基因以及细胞生长相关基因启动子区域的甲基化水平来影响基因的表达，从而抑制BIU-87细胞的生长，诱导细胞凋亡。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的观察微小RNA-34a( miR-34a )对膀肤癌细胞J82周期的影响，并探索其中的机制。方法于J82中转染miR-34a前体或miR-34a抑制物并验证转染效率，结合此前研究报道和生物信息学预测miR-34a的靶点，后通过荧光素酶报告实验验证miR-34a革巴标基因CD44，通过Western blot和实时定量PCR方法检测CD44及其周期相关蛋白及信使RNA表达水平的变化，利用流式细胞仪检测膀肤癌细胞J82周期的变化。结果miR-34a在膀肤癌细胞J82和组织中表达下调，转染miR-34a前体和抑制物后，获得满意的转染效果;双荧光素酶报告实验证实miR-34a对CD44的3'UTR活性显著调节，并伴随相关周期相关因子表达水平变化，同时观测到其对膀肤癌细胞J82周期的影响。miR-34a mimics明显降低膀肤癌细胞J82中CD44的表达，miR-34a inhibitor明显上调膀肤癌细胞J82中CD44的表达;CD44可以部分回复mir-34a对膀肤癌细胞J82周期的影响。结论微小RNA-34a通过直接靶向CD44调节膀肤癌细胞J82周期的变化
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