新疆野苹果果实总RNA提取方法的筛选

分类： 地球科学 >> 地球科学其他学科 提交时间： 2019-09-11 合作期刊: 《干旱区研究》

夏春兰 闻志彬 张玉芳

摘要： 由于新疆野苹果[WTBX](Malus sieversii[WTBZ])果实富含多糖、多酚、可溶性果胶及其他次生代谢物质，导致果实的总RNA提取相对比较困难，质量较差。因此，本试验以不同发育时期的新疆野苹果的果实为材料，采用TaKaRa试剂盒、全氏金试剂盒、田伟等改良的CTAB法、本试验改良的CTAB法(一)和CTAB法(二)这5种方法来摸索提取野苹果果实的总RNA的有效方法。结果表明：2种试剂盒均无法从野苹果果实中提取出RNA；通过3种改良CTAB法提取的RNA，在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带，并且纯度均较高， OD260/OD280值在1.8~2.2之间、OD260/OD230值大于2.0。但是只有本试验改良CTAB法(一)获得较高的RNA产量，从5个不同发育时期的野苹果果实中提取的RNA平均值在116.79~474.76 μg·g-1。改良CTAB法(一)通过延长LiCl沉淀时间，将-20 ℃放置15 min改为4 ℃放置过夜(时间不超过16 h)，可以有效地除去RNA中的杂质污染，使得RNA充分沉淀。这种改良方法耗时相对较长，需要2 d，但是方法易于操作且提取成本较低。因此，改良CTAB法(一)是适用于提取野苹果果实(尤其是发育晚期)总RNA的有效方法，完全可以满足后期的分子生物学试验所需。

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