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Your conditions: 康巧珍(3)

1. chinaXiv:201806.00187 [pdf]

利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7细胞株

王成博; 康巧珍; 丁聪; 李雅雯; 梁桃桃; 张成龙; 王文; 王婷
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的:利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9 靶向原理设计并合成3 个特异性识别4.1R 基因的向导RNA(sgRNA),构建sgRNAlentiCRISPRv2 重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒侵染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆,Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达,测序确认单克隆细胞中突变位点。结果Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失;测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了 19bp的缺失突变;并且4.1R基因敲除后,RAW264.7细胞的增殖能力显著增加。结论本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具。

submitted time 2018-06-15 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits609Downloads347 Comment 0

2. chinaXiv:201801.00606 [pdf]

利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7细胞株

王成博; 康巧珍; 丁 聪; 李雅雯; 梁桃桃; 张成龙; 王 文; 王 婷
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基 础。方法 根据 CRISPR/Cas9 靶向原理设计并合成 3 个特异性识别 4.1R 基因的向导 RNA(sgRNA),构建 sgRNAlentiCRISPRv2重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒侵染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞 并稀释至单克隆,Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达,测序确认单克隆细胞中突变位点。结果 Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失;测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了 19bp的缺失突变;并且4.1R基因敲除后,RAW264.7细胞的增殖能力显著增加。结论 本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干 扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具。

submitted time 2018-01-25 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits914Downloads411 Comment 0

3. chinaXiv:201712.00973 [pdf]

蛋白4.1家族在小鼠黑色素瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

门颖丽; 康巧珍; 丁聪; 刘诗梦; 江慧; 王晓东; 汲振余; 刘鑫; 王婷
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 筛选小鼠黑色素瘤细胞中蛋白4.1家族的表达,探讨蛋白4.1对小鼠黑色素瘤细胞增殖的影响。方法 以MEF、B16、B16-F10细胞基因组RNA和总蛋白为模板,经PCR法和Western blot筛选蛋白4.1在小鼠黑色素瘤细胞中的表达;通过分子克隆构建真核表达载体pEGFP-N1-EPB41L3并转染黑色素瘤细胞;检测表达蛋白4.1B后 B16、B16-F10细胞增殖的变化。结果蛋白4.1B在黑色素瘤细胞中表达缺失;通过转染成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-EPB41L3发现,表达蛋白4.1B的黑色素瘤细胞的增殖作用被显著性抑制。结论 通过真核表达载体 pEGFP-N1-EPB41L3 转染表达蛋白 4.1B 可显著抑制 B16 和B16-F10黑色素瘤细胞的增殖。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits557Downloads315 Comment 0

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