肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞的体外分离、鉴定及其原代培养吸收模型的构建与评估

分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》

张树敏 廖秀冬 吕林 张丽阳 罗绪刚

摘要： 本试验旨在评估十二指肠上皮细胞不同接种密度对细胞紧密连接性及细胞活力的影响，为建立肉鸡鸡胚体外原代培养十二指肠上皮细胞吸收模型选择最佳的细胞接种密度。试验采用单因子完全随机试验设计，共设3个组，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞接种密度分别为2.90×106、6.25×106、8.75×106个/mL，每个组6个重复，共培养4 d。结果表明：1）刚分离的十二指肠上皮细胞团呈球形，且细胞团的大小均一，悬浮于培养液中，贴壁后细胞团开始向外伸展，逐渐铺成片，细胞之间界限清晰、贴壁均匀，呈单层“铺路石样”生长。2）经碱性磷酸酶染色，阳性试验组的十二指肠上皮细胞胞浆被染成了蓝黑色，阴性对照组的十二指肠上皮细胞不着色。3）在细胞培养的48和72 h，Ⅰ组和Ⅱ组细胞的跨膜电阻（TEER）值均满足大于300 Ω·cm2的试验要求，酚红透过率均满足小于5%的试验要求，并且Ⅰ组细胞的TEER值均显著高于Ⅱ组（P<0.05），细胞酚红透过率均显著低于Ⅱ组（P＞0.05）。4）在细胞培养的24和48 h，Ⅰ组细胞培养液中的乳酸脱氢酶（LDH）活力均显著低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）。以上结果表明，细胞接种密度为2.90×106个/mL，培养时间为48 h时，细胞间界限清晰、生长状态良好、紧密连接性强，细胞活力最佳，即表明原代培养肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞物质吸收模型构建成功，可为后续十二指肠上皮细胞的吸收规律及其分子机制的研究提供了良好的试验模型。

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