高效液相色谱法测定瘤胃甲烷菌共存对厌氧真菌代谢葡萄糖产有机酸特性的影响

分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-23 合作期刊: 《动物营养学报》

李袁飞 孙美洲 成艳芬 朱伟云

摘要： 本试验旨在利用建立的高效液相色谱法研究瘤胃甲烷菌共存对厌氧真菌代谢葡萄糖产有机酸特性的影响。根据6种有机酸的化学特性确定紫外检测波长、缓冲液浓度、pH、流速、柱温和进样量等液相色谱条件；利用建立的高效液相色谱法检测厌氧真菌纯培养及厌氧真菌与甲烷菌共培养上清液中6种有机酸的浓度。结果表明，高效液相色谱采用的条件为：5 mmol/L磷酸二氢钾-磷酸缓冲液（pH=2.4）作为流动相，流速为0.5 mL/min，柱温25 ℃，进样量为20 μL，214 nm波长检测。6种有机酸能够在30 min内得到良好分离。各种有机酸的线性相关系数均大于0.999，检测限为0.20~1.00 μmol/L，定量限为0.667~3.333 μmol/L，回收率为92.17%~101.61%。甲烷菌共存影响了厌氧真菌的代谢产物。厌氧真菌利用葡萄糖的主要水溶性代谢产物为甲酸、乳酸、乙酸，以及微量琥珀酸、柠檬酸、α-酮戊二酸及乙醇；甲烷菌共存显著降低了上清液中甲酸和乳酸的含量（P<0.05），显著增加了乙酸含量（P<0.05）。综上，本文利用建立的高效液相色谱法可快捷、灵敏、有效地检测厌氧真菌代谢葡萄糖产生的6种有机酸的含量，并发现甲烷菌共存显著促进了厌氧真菌氢化酶体对碳水化合物的代谢。

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