乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

于丽丽 胡博 李雪 朱乃硕

摘要： 目的借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础，采用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down)验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用，为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒，对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达，与GST-beads结合孵育，构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1，转染293T细胞使其表达，然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用；构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1和pcDNA3.1-3×flag-HBx真核表达质粒, 共转染293T和HepG2细胞使其表达，通过Co-IP实验验证抗Myc抗体可以将HBx从细胞裂解液中沉淀下来，证实了它们在两种细胞系中存在相互作用。 结果显示了HBx和Tab1在体内外条件下能够发生相互作用，为进一步明确HBV X蛋白功能及作用机制奠定基础。

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