分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2019-01-17 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 通过目的基因的随机整合方式，构建得到的CHO表达细胞系，常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域，而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象，这主要是由于位点效应所导致。为了解决这个问题，现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组，将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上稳定表达区域，以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。现总共利用该技术获得了2株外源基因（人白蛋白基因）定点整合细胞系；western blot结果显示，细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性；细胞在贴壁状态下，两株细胞系在第3、12、23、35、50代，细胞每日表达的HSA质量接近，且均维持在0.5 pg/cell/day；选取一株表达细胞系，经悬浮驯化后，在批次条件培养下，第1、25及50代的悬浮细胞，在摇瓶内的表达浓度均稳定在13-14 mg/L。本研究显示了将外源基因基因定点整合于CHO细胞基因组内的的可行性；且外源基因整合在稳定表达区域后，重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性。
分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2017-10-10 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在研究饲粮肌醇添加水平对2~4月龄生长獭兔生长性能、毛皮质量、免疫器官指数和营养物质利用率的影响。选取体重相近的2月龄生长獭兔88只，随机分成4组，每组22个重复，每个重复1只。Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组为试验组，分别饲喂在基础饲粮中添加25、50、75 mg/kg肌醇的试验饲粮。试验期为60 d。结果表明：1）饲粮肌醇添加水平对生长獭兔平均日增重和料重比无显著影响（P＞0.05）。2）饲粮肌醇添加水平对生长獭兔毛皮面积、毛皮重量无显著影响（P＞0.05），但对被毛密度、被毛长度有显著或极显著影响(P＜0.05或P＜0.01)。被毛长度以Ⅲ组最长，显著长于Ⅰ组（P＜0.05），但与Ⅳ组无显著差异（P＞0.05）；被毛密度以Ⅳ组最大，极显著大于Ⅰ组和Ⅲ组（P＜0.01），显著大于Ⅱ组（P＜0.05）。3）饲粮肌醇添加水平对生长獭兔脾脏指数无显著影响（P＞0.05），胸腺指数随着肌醇添加水平的提高呈升高趋势（P＞0.05）。4）饲粮肌醇添加水平对生长獭兔粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维利用率无显著影响（P＞0.05），但对干物质、总能、粗蛋白质利用率有显著或极显著影响（P＜0.05或P＜0.01）。其中，干物质利用率以Ⅳ组最高，显著高于Ⅰ组（P＜0.05）；Ⅱ组的总能利用率显著高于Ⅰ组（P＜0.05），Ⅳ组的总能利用率极显著高于Ⅰ组（P＜0.01）；Ⅱ组和Ⅳ组的粗蛋白质利用率显著高于Ⅰ组（P＜0.05），Ⅲ组的粗蛋白质利用率极显著高于Ⅰ组（P＜0.01）。综合以上测定指标，在生长獭兔饲粮中适宜的肌醇添加水平为75 mg/kg。
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