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1. chinaXiv:201902.00015 [pdf]

木聚糖酶异源表达的研究进展

李吉萍; 张斯童; 包昌杰; 陈光
分类: 生物学 >> 生物工程

摘要:木聚糖(Xylan)在自然界中的含量极其丰富,在农作物和农林剩余物中大量存在。随着能源资源问题的日益凸显,对木聚糖的应用和研究越来越受到重视。木聚糖酶(Xylanase)是可以将木聚糖降解为低聚木糖和木糖的一类水解酶,近年来,为了实现木聚糖酶的高产、高酶活表达,科研工作者做了大量的研究工作,本文将就木聚糖酶异源表达(Heterologous expression)的研究进展进行综述。 关键词:木聚糖;木聚糖酶;异源表达

提交时间: 2019-02-13 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量14下载量5 评论 0

2. chinaXiv:201902.00016 [pdf]

新型重组毕赤酵母产人胰岛素前体的表达工艺研究

彭强强; 刘启; 徐名强; 张元兴; 蔡孟浩
分类: 生物学 >> 生物工程

摘要:以毕赤酵母为异源表达宿主合成人胰岛素前体,在实验室研究和工业生产中已有广泛应用。目前研究主要使用天然甲醇诱导型AOX1启动子,以甲醇为单一基础碳源进行胰岛素前体的诱导发酵生产。但在毕赤酵母高密度发酵生产过程中,甲醇代谢过程耗氧大、产热高,补料控制工艺复杂,限制了发酵生产的放大。本研究基于我们前期对启动子AOX1的转录调控设计研究,提出以人工设计的高效组成型转录调控器件CSAD_5驱动胰岛素前体基因表达,开发了葡萄糖为碳源的发酵生产工艺,以解决甲醇体系中的产热、耗氧以及工艺控制问题。在此基础上,通过增强筛选压力提高异源基因拷贝,获得了一株胰岛素前体高表达重组毕赤酵母,利用优化的培养工艺在5 L反应器水平发酵生产,胰岛素前体产量在108 h达到1.85 g/L,为目前报道以葡萄糖为碳源,生产人胰岛素前体的最高水平。该研究为胰岛素前体的工业生产以及毕赤酵母的应用提供了新的思路和方法。

提交时间: 2019-02-13 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量11下载量4 评论 0

3. chinaXiv:201902.00017 [pdf]

高分子囊泡在药物释放体系的应用

曹文杰; 熊向源; 龚妍春; 李资玲; 李玉萍
分类: 生物学 >> 生物工程

摘要:高分子囊泡作为一种新型的纳米药物载体,具有生物可降解性、稳定性、生物相容性以及可修饰的多功能化等特点。改变聚合物种类和亲水-疏水嵌段的比例,可以制备具有不同形态和膜特性的高分子囊泡。经过修饰后的高分子囊泡,可赋予其更多的功能,从而实现药物的控释和药物靶向的能力。本文对高分子囊泡的结构、组成和制备方法以及在药物释放体系的应用等方面进行了较为详细的综述,目的是了解高分子囊泡最新研究进展以及未来科学家们亟需要解决的重要问题。

提交时间: 2019-02-13 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量12下载量4 评论 0

4. chinaXiv:201901.00122 [pdf]

外泌体作为肿瘤标志物的研究进展

刘艳; 戴鹏; 朱运峰
分类: 生物学 >> 生物工程

外泌体是细胞内源性囊泡样生物纳米级膜结构,直径大小在40-100 nm之间,可由各种类型的细胞分泌释放。外泌体具有许多功能,如蛋白质、mRNA、miRNA和脂类的细胞间运输和传递,以及抗原递呈,还可能具有致癌的能力。肿瘤细胞所分泌释放的外泌体在肿瘤的发生、发展以及迁移等生理和病理过程中发挥重要的作用。目前从肿瘤外泌体中寻找特异性标志物已成为肿瘤研究者重点关注的方向,对肿瘤早期诊断、疗效评价和预后分析具有重要的意义。本文作者就近年来外泌体在肿瘤研究和诊断中研究进展进行综述。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量221下载量110 评论 0

5. chinaXiv:201901.00121 [pdf]

利用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达人白蛋白基因的中国仓鼠卵巢细胞系

周松涛; 陈蕴; 龚笑海; 金坚; 李华钟
分类: 生物学 >> 生物工程

通过目的基因的随机整合方式,构建得到的CHO表达细胞系,常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域,而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象,这主要是由于位点效应所导致。为了解决这个问题,现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组,将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上稳定表达区域,以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定。现总共利用该技术获得了2株外源基因(人白蛋白基因)定点整合细胞系;western blot结果显示,细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性;细胞在贴壁状态下,两株细胞系在第3、12、23、35、50代,细胞每日表达的HSA质量接近,且均维持在0.5 pg/cell/day;选取一株表达细胞系,经悬浮驯化后,在批次条件培养下,第1、25及50代的悬浮细胞,在摇瓶内的表达浓度均稳定在13-14 mg/L。本研究显示了将外源基因基因定点整合于CHO细胞基因组内的的可行性;且外源基因整合在稳定表达区域后,重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量158下载量83 评论 0

6. chinaXiv:201901.00123 [pdf]

定点突变改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化特性

阚婷婷; 宗迅成; 苏永君; 王婷婷; 李闯; 胡蝶; 邬敏辰
分类: 生物学 >> 生物工程

环氧化物水解酶能够对外消旋环氧化物进行动力学拆分保留单构型的环氧化物。测定了菜豆环氧化物水解酶 (PvEH1) 针对苯基缩水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性,并基于分子对接及多序列比对分析确定7个突变位点,通过单点和组合突变对PvEH1进行改造,以期改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚 (1a) 的催化特性。底物谱分析表明PvEH1对1a的催化活性 (157.2 U/g湿细胞) 和对映选择性 (E = 5.6) 最高。单点突变结果显示E. coli/pveh1L105I和E. coli/pveh1V106I对1a的催化活性和对映选择性均有明显提高;L105I和V106I位组合突变菌株E. coli/pveh1L105I/V106I的催化活性 (493.8 U/g湿细胞) 是E. coli/pveh1的3.1倍,对映选择性 (E = 8.3) 也提高至E. coli/pveh1的1.5倍。纯化后PvEH1L105I/V106I的催化活性为17.6 U/mg是PvEH1的1.5倍,对1a的催化效率提高至PvEH1的2.1倍。SDS-PAGE分析表明提高了蛋白的可溶性表达量。利用E. coli/pveh1L105I/V106I全细胞催化100 mmol/L 1a水解动力学拆分获得手性纯 (R)-1a (ee > 96%) 的产率和时空产率分别为31.2%和5.12 g/L/h,因此,在手性纯 (R)-1a的制备中,E. coli/pveh1L105I/V106I是一种颇具潜力的生物催化剂。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量166下载量90 评论 0

7. chinaXiv:201901.00124 [pdf]

基于核酸适配体的肿瘤免疫治疗进展

吕海银; 王腾飞; 裴仁军
分类: 生物学 >> 生物工程

肿瘤免疫治疗是通过调节机体的免疫功能来控制和杀伤肿瘤的一种治疗手段。针对免疫检查点的治疗等一系列临床突破使得肿瘤的免疫治疗受到了广泛重视。目前,抗体治疗和过继性细胞治疗是肿瘤免疫治疗的主要方式,但是这些方法仍具有副作用较强,实体瘤治疗难以实现,治疗费用高昂等缺点。因此改进和发展更加高效、安全、低成本的新技术仍十分必要。适配体是利用指数富集的配体系统进化技术筛选得到的单链寡核苷酸,有核酸“抗体”之称。适配体具有低免疫原性,组织穿透力强,易于化学合成与修饰等优势,且与其靶标的结合具有较好亲和力和特异性,可像抗体一样实现肿瘤的免疫治疗。本文对适配体在肿瘤免疫治疗相关技术中的新应用作一综述,主要包括基于免疫检查点的抗肿瘤作用、双特异性适配体的肿瘤免疫治疗、适配体靶向递送siRNA的肿瘤免疫治疗和适配体联合抗体的肿瘤免疫治疗几个方面。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量152下载量87 评论 0

8. chinaXiv:201901.00125 [pdf]

甲醇周期诱导控制强化毕赤酵母生产猪干扰素

严建; 贾禄强; 丁健; 史仲平
分类: 生物学 >> 生物工程

利用甲醇营养型毕赤酵母生产猪干扰素(pIFN-),诱导过程一般在高细胞密度、定值控制甲醇浓度于5-10 g/L下进行,此时、溶解氧浓度(DO)自然下降到接近于0的水平。如果高好氧的毕赤酵母长期处在高甲醇/低DO的诱导浓度环境会导致其代谢活性恶化;胞内甲醇积累严重;pIFN-表达生产效率低。为此,提出了一种甲醇周期诱导控制策略来强化pIFN-生产。先将甲醇控制于高浓度达7 h;再降低甲醇流加速率、将DO控制在~20%约4 h,一共重复6个循环。采用上述周期控制策略,毕赤酵母代谢活性可以长期维持在较高水平;胞内甲醇处于极低水平(≤ 0.003 g/g-DCW)、解除了甲醇毒性效应;pIFN-活性达到3.90×107 IU/mL的最高水平,是定值控制甲醇浓度时的1.86倍。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量143下载量80 评论 0

9. chinaXiv:201901.00126 [pdf]

MOFs固定5-羟甲基糠醛氧化酶及其催化活性的研究

巩凤芹; 刘启顺; 谭海东; 金花; 谭成玉; 尹恒
分类: 生物学 >> 生物工程

固定化酶作为一种绿色高效的生物催化剂,其性能远超游离酶。目前酶的固定化技术适用范围仍然较小,酶的研究范围多停留在模型酶阶段,扩大固定化酶的研究范围具有十分重要的意义。金属有机骨架材料(MOFs)作为酶固定化的载体在近些年得到了广泛的探索,但是具有生物功能的酶-MOFs复合材料的许多特性仍有待挖掘。本文采用仿生矿化的合成方法将5-羟甲基糠醛氧化酶(HMFO)固定到以沸石咪唑酯(ZIF-8)为代表的MOFs材料中,制备得到一种新的生物催化剂HMFO@ZIF-8,扫描电子显微镜表征其形态区别于经典的菱形十二面体。采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,计算得到酶的固定化效率达到89.0%。HMFO@ZIF-8催化5-羟甲基糠醛的转化率达到84.3%,收率和选择性均高于游离酶。本文拓展了MOFs固定化酶的研究范围,为研究其他生物大分子复合材料的生物催化剂提供一定的借鉴意义。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量137下载量81 评论 0

10. chinaXiv:201901.00127 [pdf]

气相色谱法对狂犬病疫苗灭活工艺中β-丙内酯研究

高彦; 杜晶晶; 王斌; 刘琦; 申志强
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:基于GC-FID法,对狂犬病疫苗生产过程中采用的β-丙内酯灭活剂进行了含量及稳定性研究。方法:气相色谱条件:采用Agilent DB-624(30 m×0.530 mm×3.00 μm)毛细管柱;升温程序:初始温度为80 ℃,保持1 min,以20 ℃/min的速率升温至200 ℃,保持3 min;色谱柱流量:3 mL/min;检测器温度:250 ℃;进样口温度:150 ℃;载气:氮气,线速度:25 cm/sec;进样量:1 μL,分流比为2:1,进样方式:手动进样。结果:以乙腈作为稀释剂,BPL在1:100~1:32000范围内线性关系良好(R2≥0.999)。在1:200、1:1000、1:8000 三个浓度水平下,加标回收率在95.04%~116.86%之间,相对标准偏差(RSD)为2.6%~3.2%,检测限为0.112 μg/mL。结论:该方法简便、专属性强、稳定且在室温条件下操作,大大降低了对试验条件和技术操作的要求,能够满足灭活狂犬病病毒工艺中对BPL检测的需求。

提交时间: 2019-01-17 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量126下载量68 评论 0

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