分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的:构建人全长DLL3的真核表达质粒，并分析上调和下调DLL3对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增人全长DLL3 基因并克隆至真核表达载体pCMV-Tag4中，通过酶切及测序鉴定后，瞬时转染HEK293T细胞，并以转染pCMV-Tag4质粒和无转染HEK293T细胞分别为阴性对照和空白对照，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot鉴定人全长DLL3基因的表达；进一步通过qRT-PCR和Western blot检测人DLL3在人正常口腔上皮细胞GES-1和AGS等3株胃癌细胞中的表达差异；当人DLL3/pCMV-Tag4 瞬时转染3 株胃癌细胞后，利用MTT检测DLL3 过表达后胃癌细胞的增殖；同时，特异性人DLL3siRNA 转染人胃癌细胞MGC803 和MKN45，利用MTT检测DLL3 下调后胃癌细胞的增殖。结果成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4重组质粒，转染HEK293T细胞24 h后，qRT-PCR和Western blot表明DLL3在mRNA和蛋白水平上的表达显著高于对照组；MTT细胞增殖实验显示：过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖，下调DLL3后抑制胃癌细胞的增殖。结论成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4 真核表达质粒并在HEK293T细胞中获得表达，过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖，下调DLL3抑制胃癌细胞的增殖，本研究为以DLL3为新靶点对胃癌进行靶向治疗提供新思路。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2018-06-15 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的:构建人全长DLL3的真核表达质粒，并分析上调和下调DLL3对人胃癌细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增人全长DLL3 基因并克隆至真核表达载体pCMV-Tag4中，通过酶切及测序鉴定后，瞬时转染HEK293T细胞，并以转染pCMV-Tag4质粒和无转染HEK293T细胞分别为阴性对照和空白对照，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot鉴定人全长DLL3基因的表达；进一步通过qRT-PCR和Western blot检测人DLL3在人正常口腔上皮细胞GES-1和AGS等3株胃癌细胞中的表达差异；当人DLL3/pCMV-Tag4 瞬时转染3 株胃癌细胞后，利用MTT检测DLL3 过表达后胃癌细胞的增殖；同时，特异性人DLL3siRNA 转染人胃癌细胞MGC803 和MKN45，利用MTT检测DLL3 下调后胃癌细胞的增殖。结果成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4重组质粒，转染HEK293T细胞24 h后，qRT-PCR和Western blot表明DLL3在mRNA和蛋白水平上的表达显著高于对照组；MTT细胞增殖实验显示：过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖，下调DLL3后抑制胃癌细胞的增殖。结论成功构建了人全长DLL3/pCMV-Tag4 真核表达质粒并在HEK293T细胞中获得表达，过表达DLL3促进胃癌细胞的增殖，下调DLL3抑制胃癌细胞的增殖，本研究为以DLL3为新靶点对胃癌进行靶向治疗提供新思路。
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