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1. chinaXiv:201812.00641 [pdf]

基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用

马占兵; 党洁; 杨继辉; 霍正浩; 徐广贤
分类: 生物学 >> 生物工程

目的 构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo) , 并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264.7稳转株观察自噬流变化。方法 应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后, 包装慢病毒,转染Raw264.7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blotting鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果 成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264.7稳定细胞系(Raw264.7-PCDH-Duo),可稳定表达双荧光蛋白,经3 mM氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论 成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。

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2. chinaXiv:201812.00642 [pdf]

BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

程瑜; 施琼; 安利钦; 范梦恬; 皇改改; 翁亚光
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。 方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。

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3. chinaXiv:201812.00643 [pdf]

免疫佐剂分类及作用机理

杨琳; 傅哲彦; 吕正兵; 舒建洪
分类: 生物学 >> 生物工程

通过现代生物技术制成的DNA疫苗、重组疫苗和亚单位疫苗等新型疫苗,虽然安全性较传统疫苗有所提高,但其免疫原性不及传统疫苗,需要通过佐剂增强疫苗的免疫效力。随着对佐剂研究的不断深入,铝佐剂、油乳佐剂、微生物类佐剂、蜂胶佐剂、左旋咪唑佐剂、脂质体佐剂、中药佐剂及小肽类佐剂等相继问世,其作用机理也随研究的不断深入逐渐清晰。通过动物免疫实验结果发现,小肽类免疫佐剂不仅可以增强特异性免疫反应,具备免疫增强剂的功效,而且获取简单,便于运输保存,安全性高,可能是未来佐剂研究的一个主要方向。

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4. chinaXiv:201812.00644 [pdf]

延迟激活对猪克隆胚胎体外、体内发育效率的影响

石俊松; 罗绿花; 周荣; 麦然标; 纪红美; 余婉娴; 吴珍芳; 蔡更元
分类: 生物学 >> 生物工程

为了提高猪克隆效率,获得更多的克隆猪,研究了延迟激活对猪体细胞克隆胚胎体外、体内发育影响。研究发现,和同步融合激活方法相比,延迟激活虽然会降低克隆重构胚的融合率(P>0.05),但能够显著提高克隆胚胎的卵裂率(P<0.01)和囊胚率(P<0.05);延迟激活方法重构胚使用CB辅助激活4h,其囊胚率均极显著高于不使用CB组(P<0.01);将克隆胚胎移植到126头受体母猪后,延迟激活组受体母猪分娩率显著高于同步激活组(P<0.05),虽然在窝均总仔、窝均活仔、克隆效率方面没有显著差异,但延迟激活组显然获得了更多的克隆仔猪。以上结果说明,延迟激活方法能够提高猪克隆胚胎的体外、体内发育效率。

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5. chinaXiv:201812.00645 [pdf]

大肠杆菌细胞裂解系统的构建及其在真菌毒素降解酶表达中的应用

赵程程; 孙长坡; 常晓娇; 伍松陵; 林振泉
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:大肠杆菌中分泌表达重组蛋白受限于其分泌效率,为此设计构建大肠杆菌诱导裂解系统以实现胞内重组蛋白的快速高效分泌。方法:利用大肠菌素E7对细胞的裂解能力,构建共表达目标重组蛋白和E7的大肠杆菌细胞裂解系统,使目标重组蛋白在E7表达后得以释放到培养基中。结果:首先以红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)为报告基因,在pET28a(+)载体上构建大肠杆菌素E7和红色荧光蛋白两个表达盒,通过对比分析IPTG一步诱导和IPTG-阿拉伯糖分步诱导系统蛋白的表达效果,发现分步诱导系统能够更高效的表达并释放目标蛋白到培养基。在IPTG-阿拉伯糖分步诱导裂解系统中表达玉米赤霉烯酮降解酶基因,培养基上清液中检测到玉米赤霉烯酮降解酶有较好的表达量和较高的活性,能够在37 ℃反应30 min的条件下降解约5.8 μg玉米赤霉烯酮毒素。结论:利用大肠菌素E7成功构建大肠杆菌细胞裂解系统,并且此系统在快速释放胞内表达外源蛋白方面有适用性。

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6. chinaXiv:201812.00646 [pdf]

光遗传学技术研究进展

郭轩彤; 张春波
分类: 生物学 >> 生物工程

光遗传学技术是结合遗传学和光学对生物体特定细胞实现精确光控的新兴生物技术。自基于微生物视蛋白的光遗传学策略应用以来,光遗传学在视蛋白的开发与优化,基于病毒和重组酶的遗传学定位表达以及光学传输技术等方面都取得了显著进展。光遗传学在现代神经生物学领域应用广泛,在神经环路、行为、中枢神经系统疾病、精神疾病的机理研究中发挥着重要作用。本文主要介绍光遗传学技术的发展历程,重点介绍光遗传学工具的优化以及定位表达,旨在为光遗传学及相关领域的研究发展提供参考。

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7. chinaXiv:201812.00640 [pdf]

菊粉的生理功能及其在畜禽生产中的应用

陈佳亿(1); 陈凤鸣(1); 欧淑琦(1); 赵玉蓉(1)
分类: 生物学 >> 动物学

菊粉是一类植物源性的天然果聚糖,具有平衡肠道微生物、调节免疫和脂质代谢以及促进矿物质吸收等作用。作为一种天然的饲料添加剂,菊粉有改善畜禽肠道健康、提高免疫力等功效,具有良好的应用前景。本文综述了菊粉的理化性质、提取工艺、主要生理功能及其在畜禽生产中的应用状况,以期为菊粉在畜禽饲料中的应用提供参考。

提交时间: 2018-12-25 来自合作期刊:《动物营养学报》 点击量397下载量203 评论 0

8. chinaXiv:201812.00647 [pdf]

条纹锯鮨(Centropristis striata)幼鱼维生素C需要量

赵亭亭; 陈超; 邵彦翔; 张清雯; 刘玲
分类: 生物学 >> 动物学

本试验旨在研究条纹锯鮨(Centropristis striata)幼鱼维生素C需要量。试验采用单因素试验设计法,选取平均体重为(88.34±24.1) g的条纹锯鮨幼鱼630尾,随机分为7组,每组3个重复,每个重复30尾鱼。各组分别投喂维生素C含量(实测值)分别为10.97(对照)、74.03、148.33、213.64、335.33、618.88和910.98 mg/kg等氮等能饲料。检测饲料维生素C含量对条纹锯鮨幼鱼生长性能、血清生化指标、相关酶活性、各组织中维生素C积累量和肌肉成分的影响。试验期8周。结果表明:1)74.03 mg/kg组的增重率和特定生长率显著高于10.97、618.88和910.98 mg/kg组(P<0.05),74.03 mg/kg组的饲料系数显著低于10.97和910.98 mg/kg组(P<0.05),10.97和910.98 mg/kg组蛋白质效率显著低于74.03和618.88 mg/kg组(P<0.05),335.33 mg/kg组的肥满度显著低于74.03、148.33和213.64 mg/kg组(P<0.05)。2)10.97、74.03 mg/kg组血清总蛋白含量显著低于其他各组(P<0.05),618.88和910.98 mg/kg组血清甘油三酯含量显著低于其他各组(P<0.05),10.97 mg/kg组血清溶菌酶活性显著低于213.64、335.33、618.88、910.98 mg/kg组(P<0.05)。3)335.33 mg/kg组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于10.97、74.03、910.98 mg/kg组(P<0.05),335.33 mg/kg组血清总抗氧化能力(T-AOC)显著高于10.97、618.88、910.98 mg/kg组(P<0.05),335.33 mg/kg组血清丙二醛(MDA)含量显著低于10.97 mg/kg组(P<0.05)。4)10.97 mg/kg组肝脏SOD和过氧化物酶(CAT)活性显著低于其他各组(P<0.05),148.33、335.33和910.98 mg/kg组肝脏MDA含量显著低于10.97 mg/kg(P<0.05)。5)74.03 mg/kg组肌肉SOD活性和T-AOC均显著高于其他各组(P<0.05)。6)213.64、335.33、618.88、910.98 mg/kg组血清谷丙转氨酶(GOT)活性显著低于10.97 mg/kg组(P<0.05),10.97 mg/kg组肝脏GOT活性显著低于其他各组(P<0.05)。10.97、74.03 mg/kg组血清谷草转氨酶(GPT)活性显著高于其他各组(P<0.05)。7)910.98 mg/kg组血清中维生素C积累量显著高于其他各组(P<0.05),910.98 mg/kg组肝脏中维生素C积累量显著高于10.97、74.03、148.33和213.64 mg/kg组(P<0.05),618.88 mg/kg组的肌肉中维生素C积累量显著高于10.97、74.03、148.33和213.64 mg/kg组(P<0.05)。8)74.03 mg/kg组肌肉水分含量显著低于10.97、148.33和213.64 mg/kg组(P<0.05),910.98 mg/kg组肌肉胶原蛋白含量显著高于其他各组(P<0.05)。由此可见,以特定生长率、肝脏中维生素C积累量和血清溶菌酶活性为评价标准,通过折线回归模型得出条纹锯鮨幼鱼饲料维生素C需要量分别为66.66、309.93和345.11 mg/kg

提交时间: 2018-12-25 来自合作期刊:《动物营养学报》 点击量385下载量187 评论 0

9. chinaXiv:201812.00648 [pdf]

胍基乙酸的生理作用和机理及其在肉鸡、猪生产方面的应用

班博; 蒋庆友; 杨泰; 田科雄
分类: 生物学 >> 动物学

胍基乙酸作为一种新型营养性饲料添加剂,对提高肉鸡和猪生产性能、促进能量代谢、加速蛋白质沉积、提高抗氧化能力、改善肉品质等方面具有一定效果。本文综述了胍基乙酸的代谢途径、生理作用及其机理,以及其在肉鸡和猪生产性能、肉品质方面的最新研究进展,以期为胍基乙酸的进一步研究和探索提供参考。

提交时间: 2018-12-25 来自合作期刊:《动物营养学报》 点击量1082下载量885 评论 0

10. chinaXiv:201812.00649 [pdf]

芳香烃受体调控肠道炎症的研究进展

李成良; 齐广海; 彭鹏; 方热军
分类: 生物学 >> 动物学

芳香烃受体(AhR)是一种需配体激活的转录因子,对环境毒素、机体异物质代谢和免疫调节等具有重要作用。近年研究发现,AhR是参与免疫调控的关键因子,其对炎症性肠道疾病(IBD)的调控已成为当前研究热点。本文综述了AhR结构、配体、信号传导通路及AhR参与调控肠道炎症的最新研究进展,为治疗IBD提供新的思路。

提交时间: 2018-12-25 来自合作期刊:《动物营养学报》 点击量356下载量163 评论 0

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