双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示库的构建及抗GDH纳米抗体筛选

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

方媛 徐广贤 王羡 王红霞 潘俊斐

摘要： 目的：构建噬菌体天然纳米抗体展示库，以期用于筛选不同抗原分子的纳米抗体筛选平台，并用艰难梭菌谷氨酸脱氢酶（GDH）抗原筛选靶向GDH的纳米抗体，对所构建的噬菌体天然纳米抗体展示库进行验证。 方法：采用Oligo DT提取双峰骆驼脾脏总RNA进行反转录，通过巢氏PCR获取全套重链可变区基因，将其构建到噬菌粒pCANTAB5E载体，经多次电转化至E.coil TG1 构建初级噬菌体抗体库，经辅助噬菌体拯救后构成噬菌体展示库，并对噬菌体展示库的库容及多样性进行分析和鉴定。同时以GDH为靶向抗原对文库进行淘筛，计算淘筛回收率，并对第三轮淘筛后平板的单克隆进行ELISA鉴定。 结果：构建的天然噬菌体纳米抗体库的插入率为95%左右，随机挑取的9个克隆氨基酸同源性为66.17%，经MEGA分析后具有较好的多样性，同时经辅助噬菌体拯救后，得到的噬菌体展示库滴度为4×1012 CFU/ml。在三轮淘筛过程中，回收率逐步升高，噬菌体得到了有效的富集，同时对阳性克隆进行测序及分析，最终得到2条抗GDH纳米抗体序列。结论：成功构建了双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示文库且多样性良好，为后续筛选其他的靶向抗原奠定了基础，同时筛选获得两条抗GDH纳米抗体序列，为制备艰难梭菌谷氨酸脱氢酶诊断抗体提供技术支撑。

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