分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：制备具有碱性成纤维细胞生长因子缓释性能手术缝纫线的复合材料，并探究其机械性能和体外释药情况。方法：利用静电纺丝技术，通过研究复合材料中物质成分的配比，优化包载效率。并研究聚己内酯-胶原复合结构 (PCL–Col) 对可控释放 bFGF 的影响，来制备具有生物活性与药物缓释性能的手术缝纫线。并观察缝纫线微观结构，检测缝纫线机械性能和载药量。结果：通过扫描电镜结果证明载药的手术缝纫线具有完整的线状结构。进一步通过拉伸与拉伸循环实验证明缝纫线具有良好的机械性能，最后通过酶联免疫吸附实验 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 证明所制备的手术缝纫线具备一定的药物缓释性能。结论：通过静电纺丝装置，优化纺丝参数，成功制备了PCL–Col–bFGF的手术缝线复合材料。该缝纫线满足缝合所需要的机械性能同时具备一定的bFGF缓释性能。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： Kex2蛋白酶是一种来源于酵母的前体加工蛋白酶。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)同源表达来源于毕赤酵母的Kex2蛋白酶(PPKex2)，研究其表达特性和酶学性质，同时与毕赤酵母表达的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Kex2蛋白酶(SCKex2)进行比较。首先，分别从毕赤酵母和酿酒酵母基因组中获得Kex2基因，将其插入到表达载体pPIC9K中，并转化毕赤酵母菌株GS115。重组菌株经甲醇诱导表达后，结果表明PPKex2的发酵上清液比活是SCKex2的7倍。Kex2蛋白酶经Q-FF强阴离子交换柱纯化后进行酶学性质研究。酶学性质研究结果表明，PPKex2的最适反应pH是8.0-9.0，最适反应温度是37 ℃，与SCKex2性质相近。在稳定性方面，PPKex2在pH 7.0时最稳定，在碱性条件下的稳定性高于SCKex2，在酸性条件下的稳定性低于SCKex2，另外PPKex2的温度稳定性略低于SCKex2。酶促反应动力学研究表明，PPKex2的kcat和kcat/Km值分别为SCKex2的4.8和3.3倍。本文首次报道了同源表达毕赤酵母Kex2蛋白酶的表达特性及酶学性质，为其今后的研究及应用奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖，迁移与侵袭的影响。方法：构建SNHG3过表达质粒，实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3.1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3.1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒，采用实时定量PCR 方法检测 SNHG3 mRNA 转录水平，Western blot 检测MMP9及EMT相关蛋白水平；集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力；划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力； Transwell 小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力；结果：过表达SNHG3后，MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高（P<0.001）；MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加（P<0.01），迁移（P<0.01）与侵袭能力（P<0.001）也显著增强，实时定量PCR， Western blot 结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论: 过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。
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