地高辛标记Ucp2 基因RNA探针的制备和应用

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-11 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

刘志贞 张凯丽 孙雨晴 赵虹 郝宇卉 李美宁

摘要： 目的：为了制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA，设计引物，通过RT -PCR方法获取Ucp2基因片段，将其克隆到pGEM -T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物，PCR扩增获得转录模板，通过Sp6及T7 RNA聚合酶，获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后，通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针，反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达，而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA 原位杂交探针，为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达，尤其在神经组织的定位奠定基础。

 点击量 4621  下载量 1766  评论