表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

韩亚丽 杨冠恒 陈雁雯 龚秀丽 张敬之

摘要： 目的：慢病毒载体(Lentiviral vector ，LVV)是一种有效的基因治疗导入系统。本研究拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体，优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：首先，比较三款不同的启动子预测软件的分析结果，分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因（β-globin）的LVV，并对其Ⅱ号内含子进行部分删减；用经优化的LVV转导β-地中海贫血（β-地贫）的小鼠诱导性多能性干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）后，进而用此iPSC制备嵌合体小鼠模型；经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果：经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大（2.3×1011PLs/ml），可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论：优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。

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