以番茄斑萎病毒核蛋白为靶点的荧光偏振 药物筛选体系的建立及应用

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-09-13 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

王景丽 丁真真 刘辉 唐延婷

摘要： 基于荧光偏振技术建立靶向番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）核蛋白（NP）与核酸相互作用的药物筛选体系，并应用该体系展开药物筛选。方法：将目的基因克隆到pGEX-6p-1表达载体上，并采用大肠杆菌表达系统进行目的蛋白的异源表达。建立靶向TSWV NP与核酸相互作用的荧光偏振药物筛选体系，对体系的结合时间、DMSO耐受、变异性和稳定性进行研究，并展开药物筛选。结果：成功构建重组质粒pGEX-6p-1-NP，在大肠杆菌中表达并分离纯化出高质量的核蛋白。基于荧光偏振技术建立了信噪比为8:1，Z因子为0.82的稳定的靶向TSWV NP与核酸相互作用的药物筛选体系，并对化合物库中1000种化合物展开药物筛选，经过初步筛选获得了1种IC50为4.146 μmol/L的化合物。结论：建立了稳定的荧光偏振筛选体系，适用于靶向NP与核酸相互作用的药物的筛选。筛选到的化合物为番茄斑萎病毒的预防和控制提供参考。

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