分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-21 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨逆转录病毒介导的短发夹RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因7（Mig-7）对肝细胞癌（HCC）细胞血管生成拟态（VM）形成及体外侵袭转移能力的影响。方法 设计2条Mig-7 mRNA寡核苷酸序列（Mig-7 shRNA-1，Mig-7 shRNA-2）和1条作为负对照的无关序列（Mig-7 shRNA-N）。构建Mig-7shRNA逆转录病毒表达载体质粒，并将要接受转染的人肝癌细胞MHCC-97H分为6组：转染Mig-7 shRNA-1组；转染Mig-7 shRNA-2组；转染Mig-7 shRNA-N组；转染空载质粒组（Vector）；重组人血管内皮抑素（ES，商品名：恩度）组；MHCC-97H细胞对照组（Control）。半定量PCR、Western blot检测其对Mig-7表达的影响；三维细胞培养观察其对VM形成的影响；细胞间粘附实验、Transwell侵袭实验及迁移实验观察其对细胞粘附、侵袭及迁移能力的影响。结果 转染后，Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组中Mig-7 mRNA与蛋白的表达、MHCC-97H细胞形成VM能力、细胞侵袭、迁移能力明显减低（P<0.05），细胞间粘附能力明显增加（P<0.05）；Mig-7 shRNA-N组、Vector组、ES组中MHCC-97H细胞Mig-7的表达、VM形成、细胞间粘附、迁移、侵袭能力较MHCC-97H细胞组均无明显变化。结论 逆转录病毒介导的shRNA能够有效下调Mig-7的表达并明显抑制HCC细胞VM形成能力及侵袭转移能力，增加细胞间的粘附作用；ES对HCC细胞的Mig-7表达、VM形成、侵袭转移及粘附能力无明显影响。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 优化一套简便、可靠、稳定的大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定及肝向分化的方案。方法 采用全骨髓差速贴壁法分离提取大鼠骨髓间充质干细胞，通过优化的1.5 h差速贴壁结合12 h首次全量换液方法，及体外改良培养方案实现细胞高效纯化扩增。流式细胞术表面标志物检测结合成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定细胞群。采用添加bFGF、HGF、EGF等多种生长因子的三步诱导法促使骨髓间充质干细胞向肝系分化，并进行形态学、免疫学、基因水平评估。结果 分离纯化的细胞群阳性表达CD29、CD44、CD90，阴性表达CD34、CD45，经成脂、成骨、成软骨诱导液作用后，油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色均呈阳性。经三步法肝向诱导处理后，细胞群呈肝样细胞形态改变，表达肝脏特异性标志物ALB、AFP，肝系相关基因表达水平呈时间依赖性逐渐上升。结论 优化后的方案能够简便、可靠、稳定地获得高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞，并能在特定微环境作用下实现肝向分化。
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