增殖细胞核抗原蛋白在Spodoptera frugiperda昆虫细胞中的表达及纯化

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

陈军军 娄颖 张元兴 刘琴 刘晓红

摘要： 目的：利用昆虫细胞表达系统生产重组的人增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen, PCNA），并进行纯化和抗体结合特性鉴定。方法：以HeLa细胞逆转录的cDNA为模板，扩增人PCNA基因，并插入杆状病毒载体AcMNPV。利用昆虫细胞得到PCNA基因的重组杆状病毒。病毒感染细胞表达蛋白，联合镍柱亲和层析和离子交换层析获得高纯度的重组人PCNA蛋白。ELISA法测定抗体结合特异性。结果：以HeLa细胞cDNA为模板得到的基因序列同GenBank的人PCNA基因序列一致。草地贪夜蛾细胞（Spodoptera frugiperda, Sf9）表达重组人PCNA（Recombinant human PCNA, rPCNA）的最佳感染值（MOI）和感染时间分别为0.05和144 h。rPCNA的产量高达110 mg/L细胞，纯度> 95％。间接ELISA法检测抗体结合特性，rPCNA的敏感性和特异性分别为93.3％和85.0％。结论：建立了rPCNA的表达和纯化方法，获得了高效表达、高度抗体结合特异性的PCNA蛋白，该蛋白能进一步开发为PCNA相关疾病的体外诊断试剂盒，具较大的应用价值。

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